[發明專利]用于增強PKLR的基因表達的組合物和方法

有效

• 申請號: 201780037995.0
• 申請日: 2017-04-20
• 公開（公告）號: CN109641063B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: J·C·塞格維亞;M·G·戈梅茲;S·納瓦羅;N·麥扎;J·布埃倫;M·G·布萊沃
• 申請（專利權）人: 能源環境和技術研究中心O.A.;M.P.;希門尼斯·迪亞茲健康研究基金會研究所;生物醫學網絡研究財團中心M.P
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;C12N15/79;C12N15/54
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 劉曉東

1.一種重組基因遞送載體，其中包含含有多核苷酸序列的表達盒，所述多核苷酸序列以5'至3'順序包含以下序列：

a)啟動子序列；

b)編碼治療基因產物的序列，其中所述治療基因產物是人丙酮酸激酶R同種型(RPK)多肽；和

c)核糖核酸(RNA)輸出信號，

其中所述啟動子序列與編碼所述人RPK多肽的序列可操作地連接，并且所述重組基因遞送載體是慢病毒。

2.權利要求1所述的重組基因遞送載體，其中所述啟動子是磷酸甘油酸激酶啟動子。

3.權利要求1所述的重組基因遞送載體，其中所述編碼人RPK多肽的序列是密碼子優化的。

4.權利要求1所述的重組基因遞送載體，其中所述RNA輸出信號是土撥鼠肝炎病毒的突變的轉錄后調控元件(Wpre)。

5.權利要求4所述的重組基因遞送載體，其中所述突變的Wpre是嵌合的Wpre，其包含與SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列。

6.權利要求1所述的重組基因遞送載體，其還包含一種或多種增強子序列。

7.權利要求1所述的重組基因遞送載體，其還包含多嘌呤區或多腺苷酸化信號序列。

8.權利要求1所述的重組基因遞送載體，其還包含以下序列中的一種或多種：

i)包裝信號序列；

ii)截短的Gag序列；

iii)Rev響應元件；

iv)中心多嘌呤區；

v)中心末端序列；和

vi)上游序列元件。

9.權利要求1-8中任一項所述的重組基因遞送載體，其還包含5'和3'長末端重復序列。

10.一種細胞，其包含權利要求1-9中任一項的重組基因遞送載體。

11.權利要求10所述的細胞，其中所述細胞是造血干細胞。

12.權利要求10所述的細胞，其中所述細胞是定型的造血紅系祖細胞。

13.一種藥物組合物，其包含藥學上可接受的賦形劑和權利要求1-9中任一項的重組基因遞送載體。

14.一種藥物組合物，其包含藥學上可接受的賦形劑和權利要求10-12中任一項的細胞。

15.權利要求1-9中任一項的重組基因遞送載體在制備用于治療或預防有此需要的受試者中的疾病或病癥的藥物中的用途，其中所述疾病或病癥是丙酮酸激酶缺乏癥。

16.權利要求10-12中任一項的細胞在制備用于治療或預防有此需要的受試者中的疾病或病癥的藥物中的用途，其中所述疾病或病癥是丙酮酸激酶缺乏癥。

17.權利要求16所述的用途，其中所述細胞對所述受試者是自體的。

18.權利要求16所述的用途，其中所述細胞對所述受試者是同種異體的。

19.一種體外在紅系細胞中表達轉基因的方法，其包括使一種或多種紅系細胞與有效量的重組病毒載體接觸，其中所述載體包含人磷酸甘油酸激酶啟動子、人丙酮酸激酶肝和紅細胞(PKLR)cDNA轉基因的密碼子優化形式和土撥鼠肝炎病毒的突變的轉錄后調控元件，其中在所述接觸后，由所述PKLR cDNA轉基因編碼的多肽在所述一種或多種紅系細胞中以可檢測的水平表達。