[發明專利]中空柱液相色譜系統和使用該系統進行的物質分離

有效

• 申請號: 201780031858.6
• 申請日: 2017-03-27
• 公開（公告）號: CN109219747B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 冨永憲子
• 申請（專利權）人: 科健化學株式會社
• 主分類號: G01N30/60
• 分類號: G01N30/60;G01N30/88
• 代理公司: 北京市蘭臺律師事務所 11354
• 代理人: 劉敏;張峰

本發明提供一種用于分離生理活性物質的液相色譜系統，目的為分離由于分離作用力太小而用以往的液相色譜系統難以分離的物質，該液相色譜系統的特征在于，其至少含有中空柱，該中空柱為沒有被填料填充的由未經處理的石英硅或天然石英制成的中空毛細管柱的液相色譜系統。

技術領域

本發明涉及一種使用中空柱液相色譜進行的物質分離分析方法。

背景技術

色譜法，作為一種分離分析手段，是一種通用的可以用在幾乎所有領域如醫學、工學、藥學、醫學，可以說是支持目前科學研究和社會生活的基礎技術之一也并不夸張。隨著社會和科技的發展，雖已實現更高靈敏度、高選擇性、高降解性、高速、自動化和小型化，但在生命科學和納米技術領域，期望更好的分離分析方法。例如，近年來，在對環境樣本和生物樣本進行分析時，為了減輕環境壓力提高分離能力，特別是小分子量化合物，更期待高分子化合物、納米粒子的高效分離提純方法。

(1)已提出環保化學的理念，期待一種和該理念相應的利于環保的中空柱液相色譜。

(2)蛋白質是一種由氨基酸殘基組成的聚合物，具有線狀結構，所述線狀被折疊以形成特定結構，在活體內起到重要的作用。另一方面，已經發現許多例子是由于折疊不能精確地進行或由于所形成的結構的變形而引起了疾病。在最近的新藥中，使用稱為蛋白質制劑的蛋白質的藥物比例正在迅速增加，并且預計該比例將來會進一步增加。當蛋白質保持其原本結構時，蛋白質制劑表現出所需的功效，但由于結構的變化，它不但沒有藥效，而且還可能使疾病惡化。盡管蛋白質的結構與功能密切相關，但是存在蛋白質吸附到常規液相色譜中使用的柱中填充的填料的問題(參考非專利文獻1和非專利文獻2)。在傳統的液相色譜中，不可能在保持其結構的同時分離和分析蛋白質。

(3)已知所謂的折疊疾病如阿爾茨海默氏病和朊病毒病是由于組織中包含的蛋白質結構的變化導致的異常聚集引起的。例如，懷疑與阿爾茨海默氏病的發病密切相關的β淀粉樣蛋白形成不同的結構，已知每種結構具有不同的物性，例如毒性。由于在蛋白質聚集過程中產生的中間體的尺寸大到幾nm到十幾μm，它不能從通用柱中的填料之間的間隙通過，因此，不能對其進行分析。此外，可以預計，由于蛋白質被柱內的填料吸附而導致結構發生變化。

現有技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1：Goda,R.et al.,Biomedical Chromatography 2007,21(10),1005-1015.

非專利文獻2：Goda,R.et al.,Journal of Chromatography B-AnalyticalTechnologies in the Biomedical and Life Science 2012,895,137-145.

發明內容

本發明要解決的問題

本發明的目的為提供一種液相色譜系統，其采用了未填充填料的長柱并利用弱填充力，使用傳統的液相色譜系統的情況下由于分離作用力小而不能分離的物質通過本發明的液相色譜系統能夠進行分離。

解決問題的手段

液相色譜法是一種分離方法，利用流動相進入固相時每種物質移動速度的差異。通常，固相作為填料填充在柱中。為實現分離，需要各種調節主要的固相和流動相。例如，關于固相，材料、表面改性、尺寸、形狀、表面積等會影響分離能力。特別是使用何種填料是很重要問題。另一方面，關于流動相，流動相的組成和組分的分配比是影響分離的分離影響因子。為實現良好的材料分離，必須適當地調整固相和流動相的上述因子。

本發明人對去除了填料、并且流動相不會成為較大的分離影響因子的液相色譜分離方法進行了深入研究。結果，開發了一種能夠在不考慮分析條件的情況下分離物質分離方法。