[發明專利]使用全乙酰基半乳糖調節重組蛋白的蛋白質半乳糖基化概況的方法

有效

• 申請號: 201780028831.1
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN109072273B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: M·喬丹;G·勒克萊爾;J·索奎特;H·布羅利;D·布魯爾曼
• 申請（專利權）人: 阿雷斯貿易股份有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 江磊;余穎

本發明涉及用于在細胞培養過程中通過用全乙酰基半乳糖補充細胞培養基來調節由哺乳動物宿主細胞表達的重組蛋白的糖基化概況，例如半乳糖基化概況的方法和組合物。

發明領域

本發明涉及用于在細胞培養過程中使用全乙酰基半乳糖(peracetyl galactose)調節由哺乳動物宿主細胞表達的重組蛋白的半乳糖基化概況的方法和組合物。

背景技術

蛋白質如治療性蛋白質或抗體的糖基化狀況是重要的特征，由于其對例如折疊、穩定性和抗體依賴性細胞毒性(ADCC，負責抗體治療效果的機制之一)的影響而導致半衰期和親和力變化，進而影響蛋白質的生物學活性(Eon-Duval等，2012)。糖基化高度依賴于用來生產感興趣蛋白質的細胞系以及細胞培養過程(pH、溫度、細胞培養基組成、原料批次間區別、培養基過濾材料、空氣等)。

ADCC活性受與Fc區的寡糖連接的巖藻糖和/或甘露糖的量影響，隨著巖藻糖減少和/或甘露糖增加可觀察到活性增強。事實上，例如，與巖藻糖基化的IgG相比，非巖藻糖基化形式表現出顯著增強的ADCC，這是由于FcγRIIIa結合能力的增強并且沒有任何補體依賴性細胞毒性(CDC)或抗原結合能力的可檢測到的變化(Yamane-Ohnuki和Satoh，2009)。類似地，顯示高水平甘露糖-5聚糖的抗體也呈現更高的ADCC(Yu等，2012)。因此，在ADCC反應是抗體活性的主要治療機制的情況下，提供方法來制備糖基化狀況以巖藻糖基化降低和/或甘露糖基化升高為特征的重組治療性蛋白質是有益的。非巖藻糖基化和/或高甘露糖基化抗體的優點還包括在低劑量下達到治療效果。然而，目前市場上的許多治療性抗體都是高度巖藻糖基化的，因為它們由哺乳動物細胞系產生，這些細胞系具有負責產物的Fc N-聚糖的核心巖藻糖基化的內在酶活性。

半乳糖基化：對抗體的活性也有影響。盡管它似乎不影響抗體與抗原的結合，但據報道，半乳糖基化的變化可能導致一些重組IgG的CDC活性發生顯著變化(Hodoniczky等，2005)。實際上，已證明相對于未修飾的(可變半乳糖基化的)對照Mab，Rituxan的去半乳糖基化使CDC減少約一半。

由于糖基化(例如半乳糖基化)可影響治療效用和安全性，因此蛋白質糖基化的調整對于市售治療性蛋白質或抗體具有特殊意義。此外，在生物仿制藥化合物框架內，重組蛋白糖基化概況的控制是至關重要的，因為所述重組蛋白的糖基化概況必須與參照產物的糖基化概況相當。

因此，仍然需要培養條件和生產方法，其允許控制重組蛋白的糖基化概況，例如半乳糖基化概況。本發明通過提供用于調節重組蛋白糖基化，例如重組蛋白半乳糖基化的方法和組合物滿足了這種需要。

發明內容

一方面，本發明提供了一種產生具有經調節的半乳糖基化概況的重組蛋白的方法，所述方法包括在補充有全乙酰基半乳糖的細胞培養基中培養表達所述蛋白的宿主細胞。

或者，這里公開了一種產生具有經調節的半乳糖基化概況的重組蛋白的方法，所述方法包括在補充有至少一種包含全乙酰基半乳糖的補料的細胞培養基中培養表達所述蛋白的宿主細胞。

在另一方面，本發明提供了一種組合物，其包含含有全乙酰基半乳糖的細胞培養基。

另一方面，本發明提供了藥物組合物，其包含通過本發明的方法產生的具有經調節的半乳糖基化概況的重組蛋白和藥學上可接受的運載體。

另一方面，本發明提供了組合物，其包含通過本發明的方法產生的具有經調節的半乳糖基化概況的重組蛋白。

在另一方面，本發明提供了全乙酰基半乳糖用于調節重組蛋白的半乳糖基化概況的用途。

全乙酰基半乳糖例如是α-2-F全乙酰基半乳糖或β-2-F全乙酰基半乳糖。

附圖說明