[發明專利]經修飾的HIV-1用于產生完全人抗體的用途

在審

• 申請號: 201780028686.7
• 申請日: 2017-03-08
• 公開（公告）號: CN109414597A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 杰里米·盧班
• 申請（專利權）人: 馬薩諸塞大學
• 主分類號: A61P37/00
• 分類號: A61P37/00;A61K39/21;C12Q1/70
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

1.產生抗體或其抗體片段的方法，其包括以下步驟：

a)向包含異源免疫細胞的哺乳動物施用包含SEQ ID NO：15所示核苷酸序列的病毒或病毒樣顆粒；以及

b)從所述哺乳動物中分離哺乳動物免疫球蛋白生成細胞群，從而產生所述抗體或其抗體片段。

2.根據權利要求1所述的方法，其還包括以下步驟：

c)將所述細胞群的VH和VL mRNA逆轉錄成VH和VL cDNA序列的混合群；

d)將DNA片段的所述混合群克隆到表達載體中；以及

e)表達克隆的DNA片段，從而產生所述抗體或其片段。

3.根據權利要求1所述的方法，其還包括以下步驟：

c)將所述免疫球蛋白生成細胞與骨髓瘤細胞融合以形成親本雜交瘤細胞；以及

d)培養所述雜交瘤細胞，從而產生所述抗體或其抗體片段。

4.根據權利要求1所述的方法，其還包括以下步驟：

c)將所述免疫球蛋白生成細胞與骨髓瘤細胞融合以形成親本雜交瘤細胞群；

d)培養所述雜交瘤細胞群；

e)將所述細胞群的VH和VL mRNA逆轉錄成VH和VL cDNA序列的混合群；

f)將DNA片段的所述混合群克隆到表達載體中并擴增所克隆的表達載體；

h)選擇表達載體亞群，其編碼針對病毒或病毒樣顆粒編碼之蛋白質的抗體或抗體片段；以及

i)并擴增所選擇的亞群，從而產生所述抗體或其抗體片段。

5.根據權利要求1至4中所述的任一項方法，其中所述異源免疫細胞是人免疫細胞。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述哺乳動物是非人哺乳動物。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述哺乳動物是嚙齒動物。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述嚙齒動物是小鼠。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述小鼠是轉基因小鼠。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述轉基因小鼠缺乏成熟的淋巴細胞和自然殺傷(NK)細胞。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述轉基因小鼠是NOD-scid IL2Rγ^null小鼠品系。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述轉基因小鼠包含移植的人組織，所述組織包含選自人胎兒胸腺組織、人胎兒肝臟組織和人CD34⁺胎兒肝臟細胞的一種或更多種組織。

13.根據權利要求12所述的方法，所述人胎兒胸腺組織和/或人胎兒肝臟組織被移植在所述小鼠腎小囊下。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述人CD34⁺胎兒肝臟細胞被全身移植。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述抗體或其抗體片段是人抗體。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述人抗體是抗HIV-1抗體。

17.根據權利要求16所述的方法，其中所述人抗體是抗HIV-1中和抗體。

18.根據權利要求14所述的方法，其中所述病毒或病毒樣顆粒還包含編碼異源蛋白質的核苷酸序列。

19.根據權利要求18所述的方法，其中所述異源蛋白質是螺旋體伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)的外表面蛋白A(OspA)。