[發明專利]產生不含聚集物的單體白喉毒素融合蛋白的方法和治療用途

在審

• 申請號: 201780025215.0
• 申請日: 2017-03-10
• 公開（公告）號: CN109790545A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: W·R·比塞;J·R·墨菲;L·徹恩格;S·古普塔;C·K·布倫
• 申請（專利權）人: 約翰·霍普金斯大學;波士頓大學理事會
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12R1/16;C12R1/19;C12N15/31;C12N15/77;C12P21/00;C12N1/21;A61K38/00;C12N15/11;C12N15/62
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 張小勇

1.一種DNA表達載體，其包含：

a.toxP；

b.阻斷Fe介導的基因表達調控的突變toxO；和

c.編碼蛋白質的DNA序列，

其中所述toxP和所述突變toxO調控編碼所述蛋白質的DNA區段的表達。

2.如權利要求1所述的DNA表達載體，其進一步包含編碼信號肽的DNA序列。

3.如權利要求2所述的DNA表達載體，其中所述蛋白質連接于所述信號肽。

4.如權利要求1所述的DNA表達載體，其中所述突變toxO是SEQ ID NO:1。

5.如權利要求2所述的DNA表達載體，其中所述信號肽是SEQ ID NO:5。

6.如權利要求1所述的DNA表達載體，其中所述蛋白質選自由CRM 197、CRM 107或其組合組成的組。

7.如權利要求6所述的DNA表達載體，其中所述蛋白質選自SEQ ID NO:11、7至20中的任一者。

8.如權利要求1所述的DNA表達載體，其中所述蛋白質包含連接于受體結合蛋白或其功能性部分的白喉毒素或其功能性部分。

9.如權利要求8所述的DNA表達載體，其中所述受體結合蛋白選自包括以下的組：IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-15、EGF、FGF、P物質、CD4、αMSH、GRP、TT片段C、GCSF、調蛋白β1、其功能性部分或其組合。

10.如權利要求8所述的DNA表達載體，其中所述蛋白質選自SEQ ID NO:12-15中的任一者。

11.一種DNA表達載體，其包含：

a.toxP；

b.阻斷Fe介導的基因表達調控的突變toxO；

c.編碼蛋白質的DNA序列，所述蛋白質包含

i.信號序列；

ii.白喉毒素或其功能性部分，其不含白喉受體結合結構域或具有非功能性白喉毒素受體結合結構域，和

iii.靶標受體結合結構域，其選自包括以下的組：IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-15、EGF、FGF、P物質、CD4、αMSH、GRP、TT片段C、GCSF、調蛋白β1、其功能性部分或其組合，

其中所述toxP和所述突變toxO調控編碼所述蛋白質的所述DNA序列的表達。

12.如權利要求11所述的DNA表達載體，其中用所述DNA表達載體轉化的細菌產生連接于信號肽的白喉毒素受體結合融合蛋白，其由所述信號肽引導至周質、培養基或這兩個位置。

13.如權利要求12所述的DNA表達載體，其中所述細菌是大腸埃希氏菌，并且所述信號肽將所述白喉毒素受體結合融合蛋白引導至所述周質。

14.如權利要求12所述的DNA表達載體，其中所述細菌是白喉棒桿菌，并且所述信號肽將所述白喉毒素受體結合融合蛋白引導至所述培養基。

15.如權利要求11所述的DNA表達載體，其包含SEQ ID NO:3。

16.如權利要求12所述的DNA表達載體，其進一步包含編碼可裂解蛋白質標簽的DNA。

17.如權利要求12所述的DNA表達載體，其中所述可裂解蛋白質標簽連接于所述白喉毒素受體結合融合蛋白。

18.如權利要求11所述的DNA載體，其中所述白喉毒素受體結合融合蛋白選自SEQ IDNo:12至15中的任一者。