[發明專利]微流體裝置中T淋巴細胞的選擇和克隆

在審

• 申請號: 201780024259.1
• 申請日: 2017-03-16
• 公開（公告）號: CN109196094A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: Y·布朗韋茨基;汪曉華;P·J·比米勒;K·G·博蒙特;R·D·小羅威;A·J·馬斯楚安尼;凱文·T·查普曼;N·C·馬克斯
• 申請（專利權）人: 伯克利之光生命科技公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;G01N35/08;G01N33/00;C12M1/24;B01D37/00
• 代理公司: 隆天知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;于磊

1.一種在微流體裝置中擴增T淋巴細胞的方法，所述微流體裝置具有流動路徑和與流動路徑流體連接的隔離塢，所述方法包括：

將一個或多個T淋巴細胞引入到微流體裝置中的隔離塢中；

使一個或多個T淋巴細胞與活化劑接觸；以及

通過微流體裝置的流動路徑灌注培養基達一段時間足以使被引入到隔離塢中的一個或多個T淋巴細胞經歷擴增。

2.如權利要求1所述的方法，其中隔離塢具有約5×10⁵至約5×10⁶立方微米的體積。

3.如權利要求1所述的方法，其中隔離塢的至少一個內表面包含涂層材料。

4.如權利要求3所述的方法，其中所述涂層材料共價結合到隔離塢的至少一個內表面，并且其中涂層材料包括含有亞烷基醚部分、糖部分、氨基酸部分或其組合的聚合物，任選地，其中涂層材料包含葡聚糖或聚乙二醇部分，任選地，其中涂層材料包含一種或多種蛋白質。

5.如權利要求3所述的方法，其中涂層材料包含分子，每個分子包括連接基團和烷基部分，其中連接基團共價鍵合到隔離塢的至少一個內表面，任選地，其中連接基團是甲硅烷氧基連接基團。

6.如權利要求5所述的方法，其中烷基部分包括含有至少10個碳原子的直鏈碳鏈，和/或其中烷基部分是氟烷基部分或全氟烷基部分。

7.如權利要求5所述的方法，其中涂層材料分子形成與內部襯底表面共價結合的致密堆積的單層結構。

8.如權利要求3所述的方法，其中涂層材料包含具有連接基團和陽離子部分和/或陰離子部分的分子，其中連接基團共價鍵合到內部襯底表面。

9.如權利要求8所述的方法，其中陽離子部分包含季銨基團或者陰離子部分包括膦酸、羧酸或磺酸。

10.如權利要求8所述的方法，其中涂層材料包含具有連接基團和兩性離子部分的分子。

11.如權利要求10所述的方法，其中兩性離子部分選自羧基甜菜堿、磺基甜菜堿、氨基磺酸和氨基酸。

12.如權利要求3所述的方法，其中活化劑共價連接或穩定結合到涂層材料，任選地，其中活化劑通過生物素-鏈霉親和素鏈接而穩定結合到涂層材料。

13.如權利要求1所述的方法，其中一個或多個T淋巴細胞是從取自受試者的外周血樣品中或從受試者的實體瘤樣品中分離的，任選地，其中實體瘤是乳腺癌，源自泌尿道、輸尿管、膀胱或尿道的癌癥，腎細胞癌，睪丸癌，前列腺癌，或精囊、精管或陰莖的癌癥，卵巢癌，子宮癌，宮頸癌，陰道癌或輸卵管癌，神經系統的癌癥，神經母細胞瘤，視網膜母細胞瘤，腸癌，結腸直腸癌，肺癌或黑素瘤。

14.如權利要求13所述的方法，其中實體瘤樣品是細針抽吸物(FNA)或活組織檢查樣本。

15.如權利要求13所述的方法，其中實體瘤是髓樣乳腺癌、間皮瘤或黑素瘤。

16.如權利要求13所述的方法，其中一個或多個T淋巴細胞來自從外周血樣品或實體瘤樣品中分離的T淋巴細胞群。

17.如權利要求16所述的方法，其中所述群富含CD3⁺T淋巴細胞。

18.如權利要求16所述的方法，其中所述群富含CD3⁺CD4⁺T淋巴細胞。