[發(fā)明專利]分子編程工具有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201780019856.5 | 申請日： | 2017-02-16 |
| 公開（公告）號： | CN108779486B | 公開（公告）日： | 2023-02-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | J·Y·岸;T·E·紹斯;尹鵬;宣鋒;N·哥帕克利什南;S·宇 | 申請（專利權(quán)）人： | 哈佛學(xué)院院長及董事 |
| 主分類號： | C12Q1/6844 | 分類號： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 中國貿(mào)促會專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038 | 代理人： | 張小勇 |
| 地址： | 美國馬*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 分子 編程 工具 | ||
1.引物交換反應(yīng)(PER)系統(tǒng)，包含：
(a)第一催化發(fā)夾分子，包含(i)未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域；(ii)通過第一催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域與第一催化發(fā)夾分子的3'亞結(jié)構(gòu)域之間分子內(nèi)核苷酸堿基配對形成的配對的莖結(jié)構(gòu)域；和(iii)連接結(jié)構(gòu)域；
(b)第二催化發(fā)夾分子，包含(i)未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域；(ii)通過第二催化發(fā)夾分子的3'亞結(jié)構(gòu)域與第二催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域之間分子內(nèi)核苷酸堿基配對形成的配對的莖結(jié)構(gòu)域；和(iii)連接結(jié)構(gòu)域，其中第二催化發(fā)夾分子的3'立足點結(jié)構(gòu)域與第一催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域互補；
(c)與第一催化發(fā)夾分子的未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域互補的第一引物；
(d)具有鏈置換活性的聚合酶；和
(e)脫氧核糖核苷酸三磷酸(dNTP)。
2.權(quán)利要求1的PER系統(tǒng)，其中(a)(iii)的連接結(jié)構(gòu)域和/或(b)(iii)的連接結(jié)構(gòu)域是環(huán)狀結(jié)構(gòu)域。
3.權(quán)利要求1的PER系統(tǒng)，還包含
(f)與第二催化發(fā)夾分子的未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域互補的第二引物。
4.權(quán)利要求1的PER系統(tǒng)，還包含
(g)第三催化發(fā)夾分子，包含(i)未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域；(ii)通過第三催化發(fā)夾分子的3'亞結(jié)構(gòu)域與第三催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域之間分子內(nèi)核苷酸堿基配對形成的配對的莖結(jié)構(gòu)域；和(iii)環(huán)狀結(jié)構(gòu)域，其中第三催化發(fā)夾分子的3'立足點結(jié)構(gòu)域與第二催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域互補。
5.權(quán)利要求4的PER系統(tǒng)，還包含
(h)與第三催化發(fā)夾分子的未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域互補的第三引物。
6.權(quán)利要求4的PER系統(tǒng)，還包含
(i)多個催化發(fā)夾分子，每個催化發(fā)夾分子包含：(i)未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域；(ii)通過多個催化發(fā)夾分子的3'亞結(jié)構(gòu)域與多個催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域之間分子內(nèi)核苷酸堿基配對形成的配對的莖結(jié)構(gòu)域；和(iii)環(huán)狀結(jié)構(gòu)域，其中每個催化發(fā)夾分子的3'立足點結(jié)構(gòu)域與多個催化發(fā)夾分子中的一個其它催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域互補。
7.權(quán)利要求6的PER系統(tǒng)，還包含
(j)多個引物，每個引物與多個催化發(fā)夾分子之一的未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域互補。
8.權(quán)利要求1的PER系統(tǒng)，其中聚合酶是phi29 DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶或Bsu DNA聚合酶。
9.引物交換反應(yīng)(PER)系統(tǒng)用于生產(chǎn)發(fā)出存在兩個靶生物分子的信號的單鏈核酸的非診斷目的的用途，包括：
在反應(yīng)緩沖液中提供：
(a)第一催化發(fā)夾分子，包含(i)未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域；(ii)通過第一催化發(fā)夾分子的3'亞結(jié)構(gòu)域與第一催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域之間分子內(nèi)核苷酸堿基配對形成的配對的莖結(jié)構(gòu)域；和(iii)連接結(jié)構(gòu)域；
(b)第二催化發(fā)夾分子，包含(i)未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域；(ii)通過第二催化發(fā)夾分子的3'亞結(jié)構(gòu)域與第二催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域之間分子內(nèi)核苷酸堿基配對形成的配對的莖結(jié)構(gòu)域；和(iii)連接結(jié)構(gòu)域，其中第二催化發(fā)夾分子的3'立足點結(jié)構(gòu)域與第一催化發(fā)夾分子的5'亞結(jié)構(gòu)域互補；
(c)與第一催化發(fā)夾分子的未配對的3'立足點結(jié)構(gòu)域互補的第一引物；
(d)具有鏈置換活性的聚合酶；和
(e)脫氧核糖核苷酸三磷酸(dNTP)，由此形成反應(yīng)混合物；和
在導(dǎo)致核酸聚合、鏈置換和退火的條件下將反應(yīng)混合物孵育足以產(chǎn)生所述單鏈核酸的時間。
10.權(quán)利要求9的用途，其中(a)(iii)的連接結(jié)構(gòu)域和/或(b)(iii)的連接結(jié)構(gòu)域是環(huán)狀結(jié)構(gòu)域。
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