[發明專利]Mini-III RNA酶、改變Mini-III RNA酶切割RNA序列的特異性的方法及其用途在審

申請號：	201780019412.1	申請日：	2017-01-20
公開（公告）號：	CN108884450A	公開（公告）日：	2018-11-23
發明（設計）人：	J.布尼克基;K.斯克沃內克;D.格洛;M.庫爾克斯卡	申請（專利權）人：	生物技術創新私人有限公司
主分類號：	C12N9/22	分類號：	C12N9/22
代理公司：	中國專利代理(香港)有限公司 72001	代理人：	初明明;羅文鋒
地址：	波蘭***	國省代碼：	波蘭;PL
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摘要：
搜索關鍵詞：	切割核糖核苷酸序列枯草芽孢桿菌氨基酸序列可移植氨基酸序列片段編碼構建編碼基因底物結構二級結構輔助蛋白顯示序列底物嵌合突變蛋白細胞
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【權利要求書】：

1. 一種具有氨基酸序列的Mini-III RNA酶，所述氨基酸序列包含受體部分和在Mini-III RNA酶結構中分別形成α4螺旋和α5b-α6環結構的可移植的α4螺旋和可移植的α5b-α6環，

其中分別形成α4螺旋和α5b-α6環結構的片段在結構上對應于分別由SEQ ID NO：1中所示的來自枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的Mini-III RNA酶的氨基酸序列片段46-52和85-98形成的α4螺旋和α5b-α6環的相應結構，

其中所述Mini-III RNA酶在dsRNA切割中顯示出序列特異性，所述dsRNA切割僅依賴于底物的核糖核苷酸序列，并且不依賴于底物結構中二級結構的出現，并且不依賴于其它輔助蛋白的存在，

并且其中所述Mini-III RNA酶不是SEQ ID NO: 1的來自枯草芽孢桿菌的Mini-III蛋白，也不是具有D94R突變的SEQ ID NO: 1。

2. 根據權利要求1所述的Mini-III RNA酶，其特征在于氨基酸序列由源自一種微生物的Mini-III RNA酶的受體部分與分別源自來自不同微生物的Mini-III RNA酶的α4螺旋和/或α5b-α6環序列的插入的可移植的α4螺旋和/或可移植的α5b-α6環構成。

3. 根據權利要求1或2所述的Mini-III RNA酶，其特征在于其氨基酸序列包含

- 源自BsMiniIII^wt(SEQ ID NO: 1)、或Caldicellulosiruptor kristjanssonii的Mini-III CkMiniIII^wt (SEQ ID NO: 2)、或多枝梭菌(Clostridium ramosum)的CrMiniIII^wt (SEQ ID NO: 4)、或熱纖維梭菌(Clostridium thermocellum)的CtMiniIII^wt(SEQ ID NO: 6)、或Faecalibacterium prausnitzii的FpMiniIII^wt(SEQ ID NO: 8)、或具核梭桿菌具核亞種(Fusobacterium nucleatum subsp. Nucleatum)的FnMiniIII^wt(SEQ IDNO: 10)、或表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)的SeMiniIII^wt(SEQ ID NO:12)、或海棲熱袍菌(Thermotoga maritima)的TmMiniIII^wt(SEQ ID NO: 14)、或現稱為Caldanaerobacter subterraneus subsp. Tengcongensis的騰沖熱厭氧桿菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)的TtMiniIII^wt (SEQ ID NO: 16)的Mini-III RNA酶的受體部分，或與其具有至少80％、優選85％、更優選90％、最優選95％同一性的氨基酸序列；

- 可移植的α4螺旋，其源自

具有包括SEQ ID NO: 1的46-52位氨基酸的氨基酸序列的BsMiniIII^wt、或具有包括SEQID NO: 2的氨基酸36-42的氨基酸序列的CkMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 4的氨基酸40-46的氨基酸序列的CtMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 6的56-62位氨基酸的氨基酸序列的CtMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 8的45-51位氨基酸的氨基酸序列的FpMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 10的氨基酸45-51的氨基酸序列的FnMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 12的43-49位氨基酸的氨基酸序列的SeMiniIII^wt、或具有包括SEQ IDNO: 14的氨基酸45-51的氨基酸序列的TmMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 16的氨基酸50-56的氨基酸序列的TtMiniIII^wt，或與其具有至少80％、優選85％、更優選90％、最優選95％同一性的氨基酸序列，和/或

- 可移植的α5b-α6環，其源自

具有包括SEQ ID NO: 1的85-98位氨基酸的氨基酸序列的BsMiniIII^wt、或具有包括SEQID NO: 2的氨基酸73-86的氨基酸序列的CkMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 4的氨基酸79-88的氨基酸序列的CtMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 6的93-106位氨基酸的氨基酸序列的CtMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 8的82-95位氨基酸的氨基酸序列的FpMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 10的氨基酸82-95的氨基酸序列的FnMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 12的82-95位氨基酸的氨基酸序列的SeMiniIII^wt、或具有包括SEQ IDNO: 14的氨基酸82-93的氨基酸序列的TmMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 16的氨基酸87-100的氨基酸序列的TtMiniIII^wt，或與其具有至少80％、優選85％、更優選90％、最優選95％同一性的氨基酸序列。