[發明專利]整合的細胞

有效

• 申請號: 201780018763.0
• 申請日: 2017-02-10
• 公開（公告）號: CN109563474B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 麥·赫德哈馬爾;莫娜·維德;烏爾麗卡·約翰遜
• 申請（專利權）人: 思百博技術股份公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C07K14/435
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 劉曉杰;武晶晶

1.一種培養真核細胞的方法，包括以下步驟：

(a)提供能夠組裝成水不溶性宏觀結構的絲蛋白的含水溶液，其中所述絲蛋白是蜘蛛絲蛋白；

(b)制備所述真核細胞的樣品與所述絲蛋白的含水混合物，其中所述絲蛋白在所述含水混合物中保持為可溶的；

(c)使所述絲蛋白在所述真核細胞存在下組裝成水不溶性宏觀結構，從而形成用于培養所述真核細胞的支架材料；和

(d)在適于細胞培養的條件下將所述真核細胞維持在所述支架材料內，

其中，使所述宏觀結構成為選自纖維、泡沫和膜的形狀。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述真核細胞選自哺乳動物細胞。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述真核細胞選自原代細胞和細胞系和干細胞；或至少兩種不同哺乳動物細胞類型的組合。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述真核細胞選自內皮細胞、成纖維細胞、角質形成細胞、骨骼肌衛星細胞、骨骼肌成肌細胞、許旺氏細胞、胰腺β細胞、胰島細胞、肝細胞、膠質瘤形成細胞和間充質干細胞。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述蜘蛛絲蛋白包含或由以下組成：蛋白部分REP和CT，其中

REP是70至300個氨基酸殘基的重復片段，選自由L(AG)_nL、L(AG)_nAL、L(GA)_nL和L(GA)_nGL組成的組，其中

n是2到10的整數；

每個單獨A區段是8至18個氨基酸殘基的氨基酸序列，其中所述氨基酸殘基中的0至3個不為Ala，并且剩余的氨基酸殘基是Ala；

每個單獨G區段是12至30個氨基酸殘基的氨基酸序列，其中所述氨基酸殘基中的至少40％是Gly；并且

每個單獨L區段是0至30個氨基酸殘基的接頭氨基酸序列；并且

CT是70至120個氨基酸殘基的片段，與SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：68具有至少70％的同一性。

6.根據權利要求1-5中任一項的方法，其中所述絲蛋白含有細胞結合基序。

7.根據權利要求1-5中任一項的方法，其中所述絲蛋白含有選自RGD、IKVAV(SEQ IDNO：10)、YIGSR(SEQ ID NO：11)、EPDIM(SEQ ID NO：12)、NKDIL(SEQ ID NO：13)、GRKRK(SEQID NO：14)、KYGAASIKVAVSADR(SEQ ID NO：15)、NGEPRGDTYRAY(SEQ ID NO：16)、PQVTRGDVFTM(SEQ ID NO：17)、AVTGRGDSPASS(SEQ ID NO：18)、TGRGDSPA(SEQ ID NO：19)、CTGRGDSPAC(SEQ ID NO：20)和FN_cc(SEQ ID NO：9)的細胞結合基序；

其中FN_cc是C¹X¹X²RGDX³X⁴X⁵C²；

其中X¹、X²、X³、X⁴和X⁵各自獨立地選自半胱氨酸以外的天然氨基酸殘基；并且C¹和C²經由二硫鍵連接。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的方法，其中步驟(b)的所述含水混合物還包含細胞結合蛋白或多肽。

9.根據權利要求1-7中任一項所述的方法，其中步驟(b)的所述含水混合物還包含層粘連蛋白。