[發(fā)明專利]淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)及其擴增調(diào)節(jié)的方法與組合物有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201780018352.1 | 申請日： | 2017-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN108884460B | 公開（公告）日： | 2023-04-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 格雷戈里·伊恩·弗羅斯特;詹姆斯·約瑟夫·奧努弗;吉亞貝·H·古比加;阿尼邦·昆都 | 申請（專利權(quán)）人： | 埃克蘇馬生物技術(shù)公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12N15/867;C12N5/0783;C12N5/10;C07K14/725;C07K14/705;C07K14/715;A61K48/00 |
| 代理公司： | 北京東方億思知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11258 | 代理人： | 肖善強 |
| 地址： | 美國佛*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 淋巴細(xì)胞 轉(zhuǎn)導(dǎo) 及其 擴增 調(diào)節(jié) 方法 組合 | ||
1.一種用于對T細(xì)胞進(jìn)行基因修飾的方法，所述方法包括：將包含T細(xì)胞的外周血單核細(xì)胞(PBMC)在離體的情況下與復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒接觸以形成轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)混合物，
其中所述復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒包含：
a)位于其表面的假型化組件，所述假型化組件能夠結(jié)合T細(xì)胞并促進(jìn)所述復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒與其的膜融合；
b)多核苷酸，所述多核苷酸包括可操作地與T細(xì)胞中的活性啟動子連接的一個或多個轉(zhuǎn)錄單元，其中所述一個或多個轉(zhuǎn)錄單元對第一工程化信號多肽進(jìn)行編碼，所述第一工程化信號多肽包括抗原特異性靶向區(qū)、跨膜域和胞內(nèi)激活域；和
c)位于所述復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的表面的活化組件，其中所述活化組件與異源膜連接序列融合，并且包含能夠刺激TCR/CD3復(fù)合物的多肽，
其中在將T細(xì)胞從轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)混合物中洗出之前將所述T細(xì)胞在離體的情況下與復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒接觸15分鐘至12小時，以及
其中所述方法在不需要預(yù)先體外刺激的情況下進(jìn)行，
其中所述接觸促進(jìn)所述T細(xì)胞與所述復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的膜融合，從而生成基因修飾的T細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在將T細(xì)胞從轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)混合物中洗出之前將所述T細(xì)胞在離體的情況下與復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒接觸15分鐘至8小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述第一工程化信號多肽是嵌合抗原受體，并且其中所述胞內(nèi)激活域是CD3ζ。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述能夠刺激TCR/CD3復(fù)合物的多肽是抗CD3抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述假型化組件包括水泡性口膜炎病毒包膜蛋白、麻疹病毒F多肽或麻疹病毒H多肽或其功能片段，以及所述復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒還包括能夠與CD28結(jié)合的膜結(jié)合多肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述假型化組件包括水泡性口膜炎病毒包膜蛋白或其功能片段。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個或多個轉(zhuǎn)錄單元編碼第二工程化信號多肽，所述第二工程化信號多肽包含淋巴增殖組件，其中所述淋巴增殖組件包含細(xì)胞因子受體多肽，所述細(xì)胞因子受體多肽包含能夠激活Jak途徑的信號結(jié)構(gòu)域，并且其中所述淋巴增殖組件不包含結(jié)合細(xì)胞因子的細(xì)胞因子受體。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個或多個轉(zhuǎn)錄單元編碼第二工程化信號多肽，所述第二工程化信號多肽包含淋巴增殖組件，其中所述淋巴增殖組件包括組成型活化的細(xì)胞因子受體多肽或其片段，以及其中所述組成型活化的細(xì)胞因子受體多肽或其片段的表達(dá)被調(diào)控。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個或多個轉(zhuǎn)錄單元編碼第二工程化信號多肽，所述第二工程化信號多肽包含淋巴增殖組件，其中所述淋巴增殖組件包括IL-7受體的胞內(nèi)信號域、IL-12受體的胞內(nèi)信號域、IL-15受體的胞內(nèi)信號域、IL-21受體的胞內(nèi)信號域，或轉(zhuǎn)化生長因子β誘餌受體的胞內(nèi)信號域。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述第一工程化信號多肽和第二工程化信號多肽從自病毒LTR或其功能片段表達(dá)的病毒基因組的反向鏈上的單一轉(zhuǎn)錄物表達(dá)。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述接觸進(jìn)行15分鐘至8小時。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述T細(xì)胞是休眠T細(xì)胞。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述假型化組件包括能夠刺激TCR/CD3復(fù)合物的多肽。
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