[發明專利]用于熒光檢測的方法和組合物

有效

• 申請號: 201780013075.5
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN108700519B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: C·T·麥基
• 申請（專利權）人: 生物輻射實驗室股份有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 蔡文清;陳揚揚

本文公開了用于成像和掃描Western或免疫印跡的方法和組合物。所述組合物包含浸沒在溶液的膜，所述溶液包含70％w/v或更多的糖以及兩性離子表面活性劑，其中，所述糖和兩性離子表面活性劑溶解于水或水性緩沖液；并且膜構造為用于在分析物檢測試驗中使用。在分析物檢測試驗中使得膜成像的方法包括：將膜浸沒在溶液中，和使得所述膜成像。本申請還公開了一種用于檢測分析物的試劑盒，所述試劑盒包含所述溶液以及構造為用于在分析物檢測試驗中使用的膜。

相關申請的交叉引用

本申請要求2016年2月24日提交的美國臨時申請號62/299,436的權益，該申請以其全文納入本文用于所有目的。

背景技術

Western或斑點印跡通常用作分析技術以檢測各種蛋白質。熒光檢測是大多數Western和斑點印跡試驗中的一種選擇方法，用于可視化和定量蛋白質。然而，通常用于試驗的硝基纖維素、聚偏二氟乙烯(PVDF)或其它膜會使得入射光發生散射，使得蛋白質難以定量。因此，本領域需要提供新型的方法和組合物以解決該光散射的問題。

發明內容

大致來說，本文提供了用于檢測和/或定量硝基纖維、PVDF或在Westen 印跡或其它分析技術中所用的其它合適的膜的熒光信號。本發明人已發現糖和表面活性劑的水性混合物提供了具有以下特性的溶液：其降低了標準捕獲膜 (例如PVDF，硝基纖維素)的背景信號、且增加了熒光檢測試劑的信號。該溶液(也可包括緩沖液)可用作例如Western印跡檢測工作流程的最終膜孵育溶液，以改進靶蛋白的檢測。

一種提供的組合物包含70％重量/體積(w/v)或更多的糖、和兩性離子表面活性劑。所述糖和兩性離子表面活性劑溶解于水或水性緩沖液。在一些實施方式中，組合物的兩性離子表面活性劑是氨基硫代甜菜堿。在一些實施方式中，氨基硫代甜菜堿是3-(二甲基(3-(4-辛基苯甲酰胺基)丙基)銨基)丙烷-1-磺酸鹽 (ASB-C80)。在一些實施方式中，兩性離子表面活性劑濃度在約0.01％至約0.2％體積/體積(v/v)的范圍內。在一些實施方式中，組合物中的糖選自下組：蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、乳糖、右旋糖、纖維二糖和半乳糖。在一些實施方式中，組合物中的糖濃度在約70％至約90％w/v的范圍內。在一些實施方式中，所述組合物還包括浸沒在水或水性緩沖液中的膜，其中所述膜配置用于在分析物檢測試驗中使用。在一些實施方式中，組合物的膜包括硝基纖維素或PVDF。在一些實施方式中，分析物檢測試驗是Western印跡。

還提供了一種在分析物檢測試驗中使得膜成像的方法，所述方法包括：將膜浸沒在溶液中。所述膜構造為用于在分析物檢測試驗中使用。所述溶液包含糖和兩性離子表面活性劑，其中，糖和兩性離子表面活性劑溶解于水或水性緩沖液。所述方法還包括：使得膜成像。在一些實施方式中，所述方法的膜包括硝基纖維素或PVDF。在一些實施方式中，分析物檢測試驗是Western印跡。在一些實施方式中，所述方法的兩性離子表面活性劑是氨基硫代甜菜堿。在一些實施方式中，所述方法的氨基硫代甜菜堿是3-(二甲基(3-(4-辛基苯甲酰胺基) 丙基)銨基)丙烷-1-磺酸鹽(ASB-C80)。在一些實施方式中，所述方法中的兩性離子表面活性劑濃度在約0.01％至約0.2％v/v的范圍內。在一些實施方式中，所述方法中的糖選自下組：蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、乳糖、右旋糖、纖維二糖和半乳糖。在一些實施方式中，所述方法中的糖濃度在約70％至約90％w/v的范圍內。

還提供了用于檢測分析物的試劑盒，所述試劑盒包含糖、兩性離子表面活性劑、以及緩沖液。在一些實施方式中，所述試劑盒的兩性離子表面活性劑是氨基硫代甜菜堿。在一些實施方式中，所述試劑盒的氨基硫代甜菜堿是3-(二甲基(3-(4-辛基苯甲酰胺基)丙基)銨基)丙烷-1-磺酸鹽(ASB-C80)。在一些實施方式中，所述試劑盒中的糖選自下組：蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、乳糖、右旋糖、纖維二糖和半乳糖。在一些實施方式中，所述試劑盒還包含結合劑。

附圖說明

圖1是浸沒在85％w/v糖溶液或水中的聚偏二氟乙烯(PVDF)膜的照片。