[發明專利]用來在過繼性免疫療法中進行免疫細胞調節的組合物和方法

在審

• 申請號: 201780007121.0
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN108473959A
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發明（設計）人: J·羅森;B·雷茨納;B·瓦拉梅爾;R·比喬戴爾;E·佩拉爾塔
• 申請（專利權）人: 菲特治療公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 王永偉;趙蓉民

1.經調節的免疫細胞群和至少兩種藥劑在制備藥物中的用途，其包括：

所述免疫細胞與足夠量的包含所述至少兩種藥劑的組合物接觸足以獲得經調節的免疫細胞群的時間；

其中所述經調節的免疫細胞群包含NK細胞；和

其中所述至少兩種藥劑包含GSK3抑制劑和(i)IL-15、(ii)MEK抑制劑和mTOR抑制劑、或(iii)STING激動劑。

2.根據權利要求1所述的用途，其中

(a)與未接觸所述至少兩種藥劑的免疫細胞相比，所述經調節的免疫細胞包含的細胞具有

(i)改進的增殖、細胞毒性、細胞因子響應和/或細胞因子釋放；

(ii)改進的細胞擴增；和/或

(iii)增加的CD57+細胞的數量或比例；

(b)在接觸所述至少兩種藥劑之前，所述免疫細胞具有以下特性中的至少一種：

(i)包含：

(1)CD57-NK細胞；或

(2)CD57-NKG2C+NK細胞；

(ii)分離自或者包含在外周血液、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、感染部位組織、腹水、胸腔積液、脾組織、或腫瘤中；

(iii)分離自：

(1)健康受檢者；

(2)患有自體免疫疾病、造血系統惡性腫瘤、病毒感染或實體瘤的受檢者；

(3)以前被施用過基因修飾的免疫細胞的受檢者；或者

(4)CMV血清陽性受檢者；

(iv)被基因組工程化并包含插入、缺失、或核酸置換；

(v)包含至少一種基因修飾形態；

(vi)從干細胞或者祖細胞體外分化；或者

(vii)從造血或非造血系的非多能細胞體外轉分化；

(c)包含所述至少兩種藥劑的所述組合物進一步包含一種或多種添加劑；和/或

(d)所述經調節的免疫細胞的制備包括：

(i)在接觸足夠量的用于調節的所述組合物的步驟之前，激活所述免疫細胞；以及任選地，在所述激活步驟之前，

(ii)使CD3和CD19細胞從用于激活和調節的所述免疫細胞中耗竭。

3.根據權利要求2所述的用途，其具有以下特性中的至少一種：

(a)其中所述干細胞包含誘導性多能干細胞(iPSC)、胚胎干細胞(ESCs)或造血干細胞；

(b)其中所述祖細胞是CD34+血原性內皮細胞、多潛能祖細胞、或NK祖細胞；

(c)其中所述干細胞或者祖細胞

(i)被基因組工程化并包含插入、缺失、或核酸置換，或者

(ii)包含至少一種基因修飾形態；

(d)其中所述免疫細胞的所述基因修飾形態包含以下中的至少一種：安全開關蛋白、靶向形態、受體、信號傳導分子、轉錄因子、藥學活性的蛋白和肽、藥物目標候選物；或者促進所述免疫細胞的植入、運輸、歸巢、活力、自我更新、持久性、免疫響應調控和調節、和/或存活的蛋白質；

(e)其中所述免疫細胞的至少一種基因修飾形態包含以下中的一種或多種：

(i)B2M、TAP1、TAP2、TAP相關蛋白、NLRC5、PD1、LAG3、TIM3、RFXANK、CIITA、RFX5、或RFXAP、以及染色體6p21區中的任何基因的缺失或表達減少；以及

(ii)與雙特異性或多特異性接合體或者通用接合體偶聯的HLA-E、HLA-G、HACD16、hnCD16、41BBL、CD3、CD4、CD8、CD47、CD113、CD131、CD137、CD80、PDL1、A2AR、Fc受體、或表面觸發受體的表達引入或增強；

(f)其中所述一種或多種添加劑包括：

(i)肽、抗體、抗體片段、細胞因子、有絲分裂原、生長因子、小RNA、dsRNA、單核血細胞、飼養細胞、飼養細胞組分或置換因子、包含一種或多種所關注多聚核酸的載體、化學治療劑或放射性部分、以及免疫調節藥物(IMiD)中的至少一種；或

(ii)包括IL2、IL12、IL18以及IL21的刺激性細胞因子中的至少一種；

(g)其中所述組合物包含：

(i)TGFβ受體抑制劑、ROCK抑制劑、PDK1激動劑、以及雷帕霉素中的一種或多種；

(ii)所述GSK3抑制劑是CHIR99021；

(iv)IL15以及STING激動劑；或

(v)至少一種選自由以下組成的群組的有機溶劑：二甲基亞砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲氧基乙烷(DME)、二甲基乙酰胺、乙醇及其組合；

(h)其中所述經調節的免疫細胞或所述一種或多種期望的免疫細胞亞群在接觸所述至少兩種藥劑后具有增加的數量或比例，所述經調節的免疫細胞或所述一種或多種期望的免疫細胞亞群包括：

(i)CD57+NK細胞或適應性NK細胞；

(ii)適應性NK細胞，其包含CD57+以及NKG2C+、低PLZF、低SYK、低FcεRγ、低EAT-2、低TIGIT、低PD1、低CD7、低CD161、高LILRB1、高CD45RO和低CD45RA中的至少一種；或

(iii)表達hnCD16的CD57+NK細胞；

其中所述經調節的免疫細胞或所述一種或多種期望的免疫細胞亞群任選地包含至少一種基因修飾形態；

(i)其中所述一種或多種期望的亞群從所述經調節的免疫細胞中分離；

(j)其中所述足夠的時間不小于16小時；

(k)其中所述用于調節的免疫細胞處于無飼養細胞的環境中；

(l)其中所述經調節的NK細胞

(i)與未調節的NK細胞相比，對CD107a、NKG2C、以及NKp30中的一種或多種的表達增加，其中其表達增加至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多；

(ii)增加擴增至少2倍；和/或

(iii)具有改進的細胞因子響應，包含一種或多種細胞因子的產生的增加，所述細胞因子包含IFNγ和/或TNFα。