[實(shí)用新型]一種用于外泌體分離提取的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201720584252.2
• 申請(qǐng)日: 2017-05-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN207062278U
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周勇浩;王會(huì)霞;崔顏宏;姬新穎
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 周勇浩;王會(huì)霞;崔顏宏;姬新穎
• 主分類(lèi)號(hào): C12M1/24
• 分類(lèi)號(hào): C12M1/24;C12M1/12;C12M1/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種用于外泌體分離提取的試劑盒，屬于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

外泌體(exosome)是由細(xì)胞經(jīng)過(guò)一系列調(diào)控過(guò)程而形成，并可分泌至胞外的分子直徑為30-100nm的亞細(xì)胞雙層膜囊泡，可以通過(guò)質(zhì)膜受體直接激活受體細(xì)胞，也可以轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)、核酸甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，從而在生理學(xué)和病理學(xué)上都發(fā)揮重要作用。

目前常用的外泌體提取方法主要包括超速離心法、免疫磁珠法、超濾離心法、聚乙二醇(Polyethylene glycol，PEG)沉淀法等。超高速離心機(jī)造價(jià)昂貴，對(duì)設(shè)備要求高，并且高速離心可能破壞外泌體的結(jié)構(gòu)，從而降低其質(zhì)量；免疫磁珠法獲得的外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)；PEG沉淀法所得外泌體存在純度和回收率低、雜蛋白較多等問(wèn)題；超濾離心法簡(jiǎn)單高效，且不影響外泌體的生物活性，但其本身難以對(duì)外泌體進(jìn)行富集。

實(shí)用新型內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型的目的是提供一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便的外泌體分離提取的試劑盒。

為達(dá)到上述目的，本實(shí)用新型提供了一種用于外泌體分離提取的試劑盒，包括盒體和盒蓋，其中，所述盒體內(nèi)設(shè)置有沉淀溶液試劑瓶放置區(qū)、緩沖溶液試劑瓶放置區(qū)、微孔濾膜放置區(qū)、超濾離心管放置區(qū)。

優(yōu)選地，該試劑盒至少包含兩個(gè)沉淀溶液試劑瓶放置區(qū)，用于放置第一沉淀溶液試劑瓶和第二沉淀溶液試劑瓶；所述第一沉淀溶液試劑瓶用于盛裝高濃度PEG溶液，所述第二沉淀溶液試劑瓶用于盛裝低濃度PEG溶液。所述高濃度PEG溶液的濃度可以為16％(質(zhì)量體積濃度)。高濃度PEG溶液在使用時(shí)與經(jīng)離心和過(guò)濾的細(xì)胞培養(yǎng)上清液等體積混合，用于沉淀和聚集外泌體。所述低濃度PEG溶液的濃度可以為5％(質(zhì)量體積濃度)。低濃度PEG溶液用于重懸經(jīng)高濃度PEG溶液提取的包含外泌體的沉淀，對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步純化。所述PEG溶液采用的PEG為PEG 6000。

優(yōu)選地，所述第一沉淀溶液試劑瓶和第二沉淀溶液試劑瓶的體積為100ml。

優(yōu)選地，該試劑盒至少包含一個(gè)緩沖溶液試劑瓶放置區(qū)，該緩沖溶液試劑瓶放置區(qū)設(shè)有盛裝PBS溶液的緩沖溶液試劑瓶。

優(yōu)選地，所述緩沖溶液試劑瓶的體積為100ml。

優(yōu)選地，該試劑盒至少包含一個(gè)用于放置微孔膜的微孔濾膜放置區(qū)。所述微孔濾膜放置區(qū)用于放置微孔濾膜，所述微孔濾膜放置區(qū)可以放置10張以上的微孔濾膜，即所述微孔濾膜的數(shù)量至少為10張。

優(yōu)選地，所述微孔濾膜的孔徑為0.22μm。

優(yōu)選地，該試劑盒包含一個(gè)超濾離心管放置區(qū)，該超濾離心管放置區(qū)包括至少10個(gè)用于放置超濾離心管的盛裝孔。

優(yōu)選地，所述超濾離心管的體積為4ml。

優(yōu)選地，所述超濾離心管為截留分子量為100kD的超濾離心管。

本實(shí)用新型中，PEG溶液對(duì)外泌體具有富集的作用，兩種濃度的PEG溶液可對(duì)外泌體進(jìn)行兩次富集，提高外泌體密度；所述微孔濾膜可以過(guò)濾除去較大的細(xì)胞碎片等物質(zhì)；所述離心超濾管可以除去粒徑較小的物質(zhì)；所述PBS溶液可用于重懸沉淀物質(zhì)，并最終重懸外泌體。

該試劑盒為外泌體的分離提取提供了一種方便的技術(shù)方案，無(wú)需進(jìn)行超速離心，就可以獲得經(jīng)PEG富集、超濾純化的外泌體，操作簡(jiǎn)便，提高外泌體密度和純度。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1中用于外泌體分離提取的試劑盒在開(kāi)啟狀態(tài)下的盒體結(jié)構(gòu)示意圖。

主要附圖標(biāo)號(hào)說(shuō)明：

1-盒體、2-高濃度PEG溶液瓶放置區(qū)、3-低濃度PEG溶液瓶放置區(qū)、4-PBS溶液瓶放置區(qū)、5-微孔濾膜放置區(qū)、6-超濾離心管放置區(qū)

具體實(shí)施方式

為了對(duì)本實(shí)用新型的技術(shù)特征、目的和有益效果有更清楚的理解，現(xiàn)參照說(shuō)明書(shū)附圖對(duì)本實(shí)用新型的技術(shù)方案進(jìn)行以下詳細(xì)說(shuō)明，但不能理解為對(duì)本實(shí)用新型的可實(shí)施范圍的限定。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供了一種用于外泌體分離提取的試劑盒，其包括以下結(jié)構(gòu)：

參照?qǐng)D1，所述試劑盒包括盒體1、高濃度PEG溶液瓶放置區(qū)2、低濃度PEG溶液瓶放置區(qū)3、PBS溶液瓶放置區(qū)4、微孔濾膜放置區(qū)5、超濾離心管放置區(qū)6。在本實(shí)施例中，高濃度PEG溶液瓶放置區(qū)2用于放置盛裝濃度為16％的PEG溶液的試劑瓶、低濃度PEG溶液瓶放置區(qū)3用于放置盛裝濃度為5％的PEG溶液的試劑瓶、PBS溶液瓶放置區(qū)4用于放置盛裝PBS溶液的試劑瓶、微孔濾膜放置區(qū)5用于放置10張微孔濾膜、超濾離心管放置區(qū)6用于放置10個(gè)超濾離心管。