[實用新型]一種鏈霉素的免疫膠體金快速檢測試劑板

有效

• 申請號: 201720566716.7
• 申請日: 2017-05-15
• 公開（公告）號: CN206945624U
• 公開（公告）日: 2018-01-30
• 發明（設計）人: 王偉萍;趙蕓;柳愛春;陳飛東;王振國;陳思思;胡葉軍
• 申請（專利權）人: 杭州南開日新生物技術有限公司;杭州市農業科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型屬于膠體金免疫層析快速檢測領域，具體涉及一種檢測鏈霉素的免疫膠體金快速檢測試劑板。

背景技術

鏈霉素屬于氨基糖苷堿性化合物，是一種廣譜抗生素，常作為飼料添加劑、治療動物疾病的治療劑、果蔬病害防治劑在畜牧業、養蜂業、水產業、農業上廣泛應用，已成為畜牧業發展必不可少的物質基礎。但是鏈霉素在農業、畜牧業等的大量使用，導致動植物體內藥物的滯留和蓄積，并會以殘留的方式進入人體及生態系統，危害人類健康和環境。食物中鏈霉素過量殘留可能會損害人的前庭神經和耳蝸神經，導致眩暈和聽力減退，同時鏈霉素還具有潛在的致畸作用。

因此，針對鏈霉素在食品中的殘留，許多國家和機構都明確規定了最大殘留限量。如歐盟2377/90/EEC規定動物源性食品肝臟中鏈霉素最大殘留限量為2.0μg/g，腎臟中為5.0μg/g，肌肉中為0.3μg/g。2002年農業部第235號公告規定，牛奶中鏈霉素最大殘留限量為200μg/kg，禽畜肉肌肉中為600μg/kg，脂肪中為600μg/kg，肝臟中為600μg/kg，腎臟中為1000μg/kg。但是由于鏈霉素效果好，價格便宜，在農業、畜牧業、水產養殖等過程中仍被大量使用。為了保障人民健康，必需對動植物食品中鏈霉素進行檢測。

目前，食品中鏈霉素殘留檢測的方法主要有微生物法、高效液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法、酶聯免疫分析法、化學發光法、熒光分光光度法等。微生物法的實驗條件、技術要求高，所需時間較長，靈敏度不夠高。高效液相色譜法雖然精確度和靈敏度較高，但是樣品前處理步驟繁瑣，對樣品純度要求高，分析成本也高。酶聯免疫分析法具有靈敏度高、特異性強、耗時短、精確度高及能大批量測定等優點，但是其中的酶活性易受反應條件的影響，試劑需低溫保存，因而實驗結果重復性差。

實用新型內容

基于現有的鏈霉素檢測方法存在的缺陷，本實用新型針對檢測要求，提供一種現場快速檢測鏈霉素的免疫膠體金試劑板。本實用新型試劑板可用于檢測鏈霉素的殘留，檢測樣本可為蜂產品、畜禽肉、水產品、奶制品、果蔬等。本實用新型試劑板檢測限符合要求，重現性好，檢測時間短，適合現場快速檢測，儀器設備要求成本低。

本實用新型試劑板應用層析式抗體免疫競爭原理，通過抗原與金標抗體的顯色反應，特異性檢測樣本中鏈霉素殘留。如果樣品溶液中含有鏈霉素殘留，鏈霉素先與膠體金顆粒上的抗體反應，因此當膠體金顆粒隨樣品溶液擴散至檢測線時，膠體金顆粒上抗體的活性位點因 被樣品溶液中鏈霉素占據而無法與檢測線上鏈霉素特異性抗原結合；當樣品中鏈霉素的含量超出試劑板檢出限時，試劑板上的檢測線顯色比質控線淺甚至顯無色，判定為陽性。相反，當樣品中鏈霉素含量在試劑板檢出限以下或者無殘留時，試劑板上的檢測線顯色與質控線相近或深，判定為陰性。

本實用新型試劑板包含試劑板塑料外殼以及位于塑料外殼內的試紙條，其特征在于：所述試劑板塑料外殼上層依次設有加樣孔和觀察窗；所述試紙條包括底板以及粘貼在底板上的樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊；所述底板上的膠體金結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊從左至右依次排列；所述膠體金結合墊上含有膠體金-抗鏈霉素單克隆抗體的結合物；所述硝酸纖維素膜上從左到右依次設有相互平行的一條檢測線與一條質控線。

本實用新型試劑板開設的加樣口長度與寬度略小于加樣孔正對的樣品墊，觀察窗的長度與寬度略小于觀察窗正對的硝酸纖維素膜，可以防止樣品滴加過程中試紙條的移動；另外加樣口和觀察窗采用開口上端大、下端小的防溢出設計，降低加樣過程中的操作誤差的產生幾率。

本實用新型試劑板的樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊各部分首尾均有1～2mm的重疊，該設計能讓樣品在試紙條上充分與膠體金結合墊、檢測線及質控線上的抗原/抗體充分反應。所述膠體金結合墊與硝酸纖維素膜上的檢測線和質控線平行。

本實用新型試劑板的樣品墊由玻璃纖維、聚酯膜或纖維素濾紙制成，結合合墊由玻璃纖維膜或聚酯纖維素膜制成，吸水墊為濾紙。

檢測線上噴有鏈霉素-載體蛋白偶聯物，其中載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白、人血清白蛋白。

質控線上噴有二抗，其中二抗可為羊抗鼠IgG、兔抗鼠IgG。

本實用新型試劑板具有如下有益效果：

(1)特異性強。本實用新型試劑板對鏈霉素的交叉反應率為100％，對其他類型抗生素如氯霉素、四環素等的交叉反應率均低于1％，具有高度的專一性。

(2)靈敏度高。本實用新型試劑板對蜂蜜中鏈霉素檢出限為10μg/kg，在同類檢測中達到了較優水平。