[實用新型]豬流行性腹瀉病毒N蛋白和S蛋白抗體的間接ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201720517045.5
• 申請日: 2017-05-05
• 公開（公告）號: CN206756849U
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 錢泓;吳有強;查銀河;賈寶琴
• 申請（專利權）人: 浙江海隆生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型屬于獸用疫病檢測技術領域，具體涉及一種豬流行性腹瀉病毒N蛋白和S蛋白抗體的間接ELISA檢測試劑盒。

背景技術

豬流行性腹瀉(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)引起的一種以嘔吐、腹瀉和脫水為主要癥狀的腸道傳染病。該病對各種年齡階段的豬均易感，尤其是7日齡以內的哺育仔豬，感染后死亡率高達50％-90％。近幾年，該病在我國的發病率、死亡率均呈上升趨勢，給養豬行業造成了重大經濟損失。

PEDV N蛋白是由441個氨基酸組成，分子量約為56kDa。PEDV N蛋白與病毒基因組RNA相互纏繞形成病毒核衣殼，在病毒RNA合成過程中發揮著重要作用。另外，N蛋白在PEDV的結構蛋白中所占的比例最大，在感染的細胞中得到大量表達。豬在感染PEDV的早期，體內就能產生針對N蛋白的高水平抗體。最后，N蛋白十分保守，所以N蛋白在PEDV分子生物學診斷技術中具有很好的應用前景。

PEDV S蛋白為伸出病毒顆粒囊膜的20nm球桿形糖蛋白，分子量約為180-220kDa，約由1383個氨基酸組成。根據PEDV與其它冠狀病毒S蛋白的保守序列的相似性，將PEDV S蛋白劃分為S1(1-789aa)和S2(790-1383aa)兩個結構域，其中S1位于病毒表面，主要作用在于識別受體并與宿主細胞受體相結合，并介導中和抗體的產生。S2主要負責病毒囊膜與宿主細胞膜的融合，并將病毒RNA導入宿主細胞內，從而引起細胞的感染。另外，PEDV S蛋白也是誘導宿主體液免疫反應的免疫原蛋白。因此，PEDV S蛋白不僅在PEDV分子生物學診斷技術中也具有很好的應用前景，而且也是PEDV亞單位疫苗研究的重要蛋白之一。

隨著科學技術的進步，使用PEDV S蛋白作為PEDV新型亞單位疫苗的研究也在逐步推進，在豬群免疫PEDV S蛋白亞單位疫苗后，為了能夠區分疫苗免疫產生抗體和野毒感染產生的抗體(目的在于指導豬場對PEDV的凈化以及評價疫苗的免疫效果)，這2種使用不同蛋白包被的試劑盒都會使用到。但是，目前市場上面還沒有一個能夠同時檢測針對這2個蛋白的抗體檢測試劑盒，且分別使用不同的試劑盒分開檢測時，誤差較大(分開兩次操作，就會產生2次誤差，而在同一個試劑盒中同時檢測，就會減少分開檢測帶來的誤差)。

實用新型內容

本實用新型的目的是為了提供一種快速、有效、同時檢測豬流行性腹瀉病毒N蛋白和S蛋白抗體的間接ELISA檢測試劑盒，為實驗動物篩選、PEDV亞單位疫苗免疫效果的評價以及豬場PEDV凈化提供新的快捷高效的工具；同時進一步減少分開檢測時帶來的誤差。

本實用新型提供了一種豬流行性腹瀉病毒N蛋白和S蛋白抗體的間接ELISA檢測試劑盒，所述試劑盒有一個盒體(1)，盒體(1)內設有抗原包被反應板存放槽(2)、樣品稀釋板存放槽(3)、流行性腹瀉病毒N蛋白抗體陽性對照液孔槽(4)、豬流行性腹瀉病毒S蛋白陽性對照液孔槽(5)、豬流行性腹瀉病毒N蛋白和S蛋白陰性對照液孔槽(6)、樣品稀釋液孔槽(7)、酶結合物孔槽(8)、濃縮洗滌液孔槽(9)、TMB顯色液(10)、終止液孔槽(11)和操作說明書存放槽(12)；抗原包被反應板存放槽(2)內放置抗原包被反應板，樣品稀釋板存放槽(3)內放置樣品稀釋板，各孔槽中(4-11)放置裝有相應溶液的試劑瓶，操作說明書存放槽(12)內放置操作說明書；所述的抗原包被反應板分為檢測區I和檢測區II，檢測區I和檢測區II分別包被豬流行性腹瀉病毒N蛋白抗原和豬流行性腹瀉病毒S蛋白抗原。

本實用新型的技術方案中，優選地，所述的抗原包被反應板的規格為96孔，每個試劑盒共有5塊包被板，每塊包被板從左至右平均分為檢測區I和檢測區II。

本實用新型的技術方案中，優選地，所述的樣品稀釋板的規格為96孔，每個試劑盒共有5塊樣品稀釋板。

本實用新型的技術方案中，優選地，所述的抗原包被反應板和樣品稀釋板都是可以拆卸的96孔板，每塊板都可以拆卸為12排，每排8孔。

本實用新型的技術方案中，優選地，所述的豬流行性腹瀉病毒N蛋白抗體陽性對照液和豬流行性腹瀉病毒S蛋白抗體陽性對照液分別為用樣品稀釋液100倍稀釋的豬流行性腹瀉病毒N蛋白和S蛋白抗體的豬陽性血清，分別按2mL/瓶分裝。