[實(shí)用新型]一種臍血造血干細(xì)胞凍存管

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201720247024.6
• 申請(qǐng)日: 2017-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN206744390U
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭守河;張康
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京九壽堂醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬于干細(xì)胞領(lǐng)域，具體涉及一種臍血造血干細(xì)胞凍存管。

背景技術(shù)

臍血干細(xì)胞是臍血中的一種具有分化潛能的原始細(xì)胞，具備自我更新和增殖的能力，并能在特定因素的影響或誘導(dǎo)下，向各種細(xì)胞或組織分化。臍血造血干/祖細(xì)胞具有高度的自我更新能力或復(fù)制能力，能保持干細(xì)胞數(shù)量恒定，并能進(jìn)一步分化為各系祖細(xì)胞及成熟細(xì)胞。CD34抗原是分離純化造血干/祖細(xì)胞的主要標(biāo)志，臍血中的CD34+細(xì)胞群在數(shù)量、質(zhì)量和增殖能力方面高于外周血，臍血中的造血干/祖細(xì)胞具有更原始、更強(qiáng)的增殖分化能力。近年來，臍血造血干細(xì)胞移植已發(fā)展為一種高科技生物治療手段，廣泛應(yīng)用于許多疾病的治療，包括惡性血液病、自身免疫性疾病、嚴(yán)重免疫缺陷癥等，臨床證明具有一定的療效。

冷凍保存是臍血保存和造血干細(xì)胞移植的關(guān)鍵。已知，臍血干細(xì)胞在液氮中凍存6個(gè)月、1年、2年后的數(shù)量和活性無明顯變化，凍存效果較好，因而建議臍血干細(xì)胞長期保存應(yīng)置于液氮中。鑒于-80℃凍存的方法方便、成本較低、應(yīng)用廣泛，6個(gè)月以內(nèi)的凍存采用-80℃凍存更為方便。徐長根等研究(-80℃下不同凍存時(shí)間對(duì)臍血造血干細(xì)胞保存效果的影響，臨床輸血與檢驗(yàn)2010年4月第12卷第2期)發(fā)現(xiàn)，臍血細(xì)胞在-80℃下保存1、2、3、4、8周后，各組的有核細(xì)胞數(shù)和CD34+數(shù)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在凍存16、32周后較1周的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。臺(tái)盼藍(lán)拒染率在8、16、32周較1周的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

發(fā)明內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種臍血造血干細(xì)胞凍存管，用于臍血造血干細(xì)胞在-80℃條件下6個(gè)月以內(nèi)的有效凍存。

上述目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種臍血造血干細(xì)胞凍存管，包括凍存管主體，該凍存管主體的內(nèi)壁設(shè)有包被層，包被層為γ聚谷氨酸材質(zhì)。

優(yōu)選地，所述γ聚谷氨酸的分子量為70萬克/摩爾。

優(yōu)選地，γ聚谷氨酸包被層的厚度為0.2-0.4mm。

一種制備上述臍血造血干細(xì)胞凍存管的方法，包括如下步驟：

步驟S1，將無菌γ聚谷氨酸溶于無菌水中，制成濃度為0.1-0.2mg/mL的γ聚谷氨酸溶液，用0.22μm濾膜過濾，備用；

步驟S2，取上述γ聚谷氨酸溶液加入市售凍存管中，置于35-45℃無菌條件靜置2-4小時(shí)；

步驟S3，傾倒凍存管中剩余溶液，用無菌水清洗2-3次，置于無菌條件備用。

本實(shí)用新型的有益效果：

本實(shí)用新型提供的凍存管內(nèi)壁含有γ聚谷氨酸包被層，使用本實(shí)用新型凍存管凍存臍血造血干細(xì)胞時(shí)，-80℃凍存6個(gè)月細(xì)胞數(shù)量和活性無明顯下降，顯著優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。因此，臍血造血干細(xì)胞6個(gè)月內(nèi)的短期保存可以使用本實(shí)用新型提供的凍存管在-80℃凍存；超過6個(gè)月的長期凍存建議使用液氮保存。

附圖說明

圖1為本實(shí)用新型凍存管結(jié)構(gòu)示意圖，圖中1為γ聚谷氨酸包被層；

圖2為包被凍存組和常規(guī)凍存組6個(gè)月凍存期內(nèi)臺(tái)盼藍(lán)拒染率變化。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖詳細(xì)介紹本實(shí)用新型的技術(shù)方案和技術(shù)效果。未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如教科書和實(shí)驗(yàn)指南中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件，為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知或易于獲知。

實(shí)施例1本實(shí)用新型凍存管的制備

取市售2mL康寧凍存管自制本實(shí)用新型提供的凍存管，具體步驟如下：

步驟S1，將無菌γ聚谷氨酸(采用γ射線鈷60照射滅菌，分子量70萬克/摩爾)溶于無菌水中，制成濃度為0.15mg/mL的γ聚谷氨酸溶液，用0.22μm濾膜過濾，備用；

步驟S2，取2mLγ聚谷氨酸溶液加入2mL康寧凍存管中，于40℃無菌條件靜置3小時(shí)；

步驟S3，傾倒凍存管中剩余溶液，用無菌水清洗3次，置于無菌條件備用。

顯微鏡觀察顯示，凍存管內(nèi)壁形成均勻的γ聚谷氨酸包被層，包被層厚度0.3mm。

γ聚谷氨酸溶液的濃度可以在0.1-0.2mg/mL之間調(diào)整，靜置溫度在35-45℃之間調(diào)整，靜置時(shí)間4-5小時(shí)，最終獲得的包被凍存管內(nèi)壁的γ聚谷氨酸包被層厚度在0.2-0.4mm之間。

其他規(guī)格的凍存管制備方法類似。

當(dāng)然，為了提高科研人員的工作效率，可以制備成預(yù)包被凍存管成品銷售給科研人員。

實(shí)施例2凍存管內(nèi)壁包被對(duì)凍存效果的影響

一、實(shí)驗(yàn)方法