[實用新型]一種超高效感受態細胞制備試劑盒

有效

• 申請號: 201720017637.0
• 申請日: 2017-01-07
• 公開（公告）號: CN206616211U
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 賀其其;鄭幫
• 申請（專利權）人: 上海邁其生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型屬于生物技術領域，涉及一種感受態細胞制備試劑盒，具體涉及一種超高效感受態細胞制備試劑盒。

背景技術

在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的特定基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌，需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態以攝取外源DNA。轉化過程所用的受體細胞一般是限制修飾系統缺陷的變異株，即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變體,它可以容忍外源DNA分子進入體內并穩定地遺傳給后代。受體細胞經過一些特殊方法 (如電擊法,CaCl2,RbCl(KCl)等化學試劑法)的處理后,細胞膜的通透性發生了暫時性的改變,成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞(Competentcell)。

目前感受態細胞制備技術成熟，但各科研機構、高校實驗室或市場已有產品均有針對制備方法進行不同的優化改進，但所制備的感受態細胞往往有轉化率低下，或轉化率不穩定的缺點，致使后續試驗存在受到感受態細胞質量差的影響或實驗結果不可靠的問題，因此開發一種可以快速、操作簡單、所制備的感受態細胞轉化率高的超高效感受態細胞制備試劑盒顯得尤為重要。

實用新型內容

本實用新型要解決的技術問題為目前市場上針對感受態細胞制備的試劑盒操作復雜、耗時長、所制備感受態細胞轉化率低下或不穩定的問題，本實用新型能較好的應用于超高效感受態細胞的制備，體積小，操作簡單、便于運輸攜帶和使用。

為實現上述目的，本實用新型采用以下技術方案：

一種超高效感受態細胞制備試劑盒,其包括盒體(1)、海綿襯墊(2)，所述的海綿襯墊(2)置于盒體(1)內，海綿襯墊(2)上設有容器孔并裝有多個裝有試劑的試劑瓶或試劑管，分別為裝有試劑A的試劑瓶(3)、裝有試劑B的試劑瓶(4)、裝有pUC19質粒的試劑管(5)。

所述的容器孔較佳的為3個，容器孔在所述的襯墊上為單排排列，上述的裝有試劑A的試劑瓶為20ml試劑瓶，裝有試劑B的試劑瓶為20ml試劑瓶,裝有 pUC19質粒的試劑管為0.5ml試劑管。

上述的超高效感受態細胞制備試劑盒試劑A主要包括20mmol/L的CaCl2,試劑B主要包括80mmol/L的MgCl2溶液中。.

優選地，所述的pUC19質粒為本領域常規質粒。

本實用新型的保存溫度為-20℃，盡量減少反復凍融。

本實用新型較佳的使用方法為：

1.菌體的培養；

2.菌體的收集；

3.菌體的重懸；

4.分裝并保存；

5.轉化效率的測試。

優選地，所述的高效感受態細胞制備步驟包括：

1.菌體的培養，挑取凍存的甘油菌或挑取劃線活化的單菌落至70ml的LB 培養基進行培養，直至OD600達0.3至0.4；

2.菌體的收集，冰浴15分鐘，4攝氏度10000g離心5分鐘，棄上清；

3.加入預冷5ml的試劑A和試劑B，輕輕晃動并用移液器捶打重懸菌體；

4.重懸的菌體即為感受態細胞，冰上分裝，-80攝氏度保存；

5.轉化效率的測試。

應用本實用新型的有益效果為：本實用新型提供的一種超高效感受態細胞制備試劑盒，通過使用優化設計的制備方法，有效克服了常規制備方法步驟繁瑣，耗時長，制備的感受態細胞轉化率低下或轉化率不穩定等問題。

本實用新型提供的超高效感受態細胞制備試劑盒設計合理，內部結構及各試劑瓶和試劑管排列有序，大小適宜，便于運輸和使用。

附圖說明

圖1為本發明的超高效感受態細胞制備試劑盒結構示意圖。

具體實施方式

為了能夠更清楚地描述本發明的技術內容，下面結合具體實施例來進行進一步的描述。

本發明所述的一種超高效感受態細胞制備試劑盒，包括試劑A，試劑B，pUC19 質粒。

所述的，本實用新型優選的試劑A和試劑B的體積均為15ml，試劑瓶規格為20ml。

所述的pUC19質粒為本領域常規的質粒，pUC19質粒的體積為0.05ml，離心管規格為0.5ml。

所述的超高效感受態細胞制備用試劑A包括主要包括20mmol/L的CaCl2,試劑B主要包括80mmol/L的MgCl2溶液中。