[發明專利]一種雙波長共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法

有效

• 申請號: 201711500100.0
• 申請日: 2017-12-30
• 公開（公告）號: CN108279222B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 白研;蘇政權
• 申請（專利權）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

本發明涉及一種雙波長共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，屬于大分子檢測領域。為了克服現有技術中對于成品中殼聚糖的含量難以定量，操作技術繁瑣的技術不足，本發明提供一種雙波長共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，本發明利用一定條件下，亮藍染料與殼聚糖結合，形成一種能使體系中的共振瑞利散射信號明顯增強的離子締合物，并在345nm和445nm處出現了兩個特征峰。在選定條件下，殼聚糖濃度在0.005?1.8μg/mL范圍內與共振瑞利散射強度有良好的線性關系，據此建立了一種測定殼聚糖含量的雙波長共振瑞利散射法。本方法測定受殼聚糖的分子量的影響，具有試劑廉價，靈敏度高，重現性好，抗干擾能力強和操作簡便等優點。

技術領域

本發明涉及一種雙波長共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，屬于大分子檢測領域。

背景技術

甲殼素(chitin)又名幾丁質，是由N-乙酰-2-氨基-2-脫氧-D-葡萄糖以β-1，4糖苷鍵形式連接而成的多糖。其廣泛存在于甲殼動物蝦、蟹及昆蟲等的外殼，自然界中的低等植物菌類、藻類的細胞，高等植物的細胞壁等。甲殼素每年生物合成的量多達1000億噸，其存量在自然界中僅次于纖維素。

殼聚糖(chitosan，CTS)是線性氨基多糖甲殼素通過脫乙酰反應生成的物質，其分子鏈上分布著許多氨基、羥基和脫乙酰基，其分子量從幾十萬到幾百萬不等，在水溶液中形成各種分子內和分子間氫鍵，且這些氫鍵使殼聚糖形成疏水微區，進而形成其雙螺旋結構。殼聚糖在酸性溶液中，氨基吸附質子后形成帶正電荷離子，可以與帶負電荷的陰離子通過靜電結合及疏水作用形成締合物。殼聚糖的優良特性分別運用在醫藥學、保健食品、水處理、金屬提取及回收等諸多行業中具有廣泛的用途，尤其是保健食品方面的應用逐漸廣泛，因此準確測定殼聚糖的含量對于研究和開發殼聚糖具有重要意義。目前，殼聚糖含量的測定方法有光譜法、電化學法、滴定法、色譜法等四類。

共振瑞利散射(Resonance Rayleigh Scattering，RRS)法是指當瑞利散射位于或者接近于其分子吸收帶的時候，電子吸收電磁波頻率與散射頻率相同，電子因共振而強烈吸收光的能量并產生再次的散射，而這吸收-再散射過程稱為共振瑞利散射，且其由于散射強度比單純瑞利散射提高了幾個數量級，因此不再遵循瑞利定律。共振瑞利散射法是近年來才發展起來的靈敏度高、操作簡單的分子光譜分析方法。目前共振瑞利散射法已廣泛應用于生物大分子的分析、無機物及藥物分析、痕量無機離子的測定及納米離子表征等方面的研究。本文將其法應用于糖類物質的分析，建立測定殼聚糖的共振瑞利散射新方法，并研究其反應適宜條件及其影響因素。

亮藍(Brilliant blue)是一種陰離子染料，在弱酸條件下，帶負電荷的亮藍與帶正電荷的殼聚糖發生離子締合反應，其離子締合物在345nm、445nm處產生兩個新的特征峰，且在一定濃度范圍內，散射強度與殼聚糖含量呈線性關系。根據此特性，建立一種抗干擾能力強的共振瑞利散射法，此方法適合測定用于保健品中殼聚糖含量的定量分析。

發明內容

為了克服現有技術中對于成品中殼聚糖的含量難以定量，操作技術繁瑣的技術不足，本發明提供一種雙波長共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，本發明利用一定條件下，亮藍染料與殼聚糖結合，形成一種能使體系中的共振瑞利散射信號明顯增強的離子締合物，并在345nm和445nm處出現了兩個特征峰。在選定條件下，殼聚糖濃度在0.005-1.8μg/mL范圍內與共振瑞利散射強度有良好的線性關系，據此建立了一種測定殼聚糖含量的雙波長共振瑞利散射法。本方法測定受殼聚糖的分子量和脫乙酰度的影響，具有試劑廉價，靈敏度高，重現性好，抗干擾能力強和操作簡便等優點。

一種雙波長共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，其包括下述步驟：

1)繪制ΔI和不同分子量的殼聚糖濃度的標準曲線