[發(fā)明專利]一種通過紫外分光光度法準確測定殼聚糖含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711500040.2
• 申請日: 2017-12-30
• 公開（公告）號: CN108051386B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 白研;蘇政權(quán);毋福海;張艷林
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東藥科大學(xué)
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

1.一種通過紫外分光光度法準確測定殼聚糖含量的方法，其包括下述步驟：

1)繪制ΔA和不同分子量的殼聚糖濃度的標準曲線：向10mL比色管中依次加入1.0mL一定濃度梯度的低分子殼聚糖標準溶液，1.5mL濃度為2.0×10^-4mol/L的萘酚綠B溶液，1.50ml6.0×10^-2g/L的吐溫20表面活性劑溶液，1.00ml pH4.50的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，使用蒸餾水定容后充分搖勻，將其置于80℃水浴加熱8min，冷卻至室溫后于紫外分光光度計上，在體系的最佳波長478nm處以水為參比測量吸光度；其中試劑空白記為A₀，含殼聚糖的溶液記為A，并計算ΔA＝A-A₀，建立ΔA與低分子量殼聚糖濃度的標準曲線C1；使用中分子量殼聚糖溶液替換低分子殼聚糖溶液，建立ΔA與中分子量殼聚糖濃度的標準曲線C2；使用高分子量殼聚糖溶液替換低分子殼聚糖溶液，建立ΔA與高分子量殼聚糖濃度的標準曲線C3；

2)10μg/mL的樣品工作液的制備：稱取一定量待檢測樣品的膠囊，使用冰醋酸溶解并將其定容得到樣品儲備液，用漏斗脫脂棉過濾儲備液，濾液經(jīng)6000r/min，離心機離心20min，取上清液2.5mL于100mL容量瓶，定容，得濃度為10μg/mL的樣品工作液；

3)根據(jù)殼聚糖分子量選擇標準曲線：使用步驟1)中檢測方法繪制ΔA和樣品工作液的標準曲線，并將其與不同分子量的殼聚糖標準曲線比較，確定相對應(yīng)的殼聚糖的分子量所使用的回歸方程；

4)樣品中殼聚糖含量確定：取樣品工作液1mL，按步驟1)檢測方法進行測定，在478nm處測定其吸光度值A(chǔ)，并計算ΔA＝A-A₀，將ΔA代入線性回歸方程求得樣品中殼聚糖的含量，同時做加標回收試驗；

所述的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液pH為4.50；步驟1)中溶液的加入順序為首先加入殼聚糖標準溶液，其次加入萘酚綠B，再者加入吐溫20表面活性劑溶液，最后加入醋酸-醋酸鈉緩沖液；所述濃度為6.0×10-2g/L吐溫20表面活性劑溶液加入量為1.50ml；冷卻至室溫至測定的時間為8min-2h；步驟1)標準曲線C1，C2與C3中殼聚糖的濃度范圍1.0-4.0μg/mL。