[發明專利]一種共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法

在審

• 申請號: 201711500039.X
• 申請日: 2017-12-30
• 公開（公告）號: CN108195810A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 白研;蘇政權
• 申請（專利權）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/31;G01N21/47;G01N1/28;G01N1/34
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

本發明涉及一種共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，屬于大分子檢測領域。本發明利用一定條件下，加入一定量低濃度的膠體保護劑使體系更穩定，且在一定濃度范圍內，共振瑞利散射光譜增強值與殼聚糖的濃度成正比，以此作為殼聚糖的定量基礎，建立了測定殼聚糖的共振瑞利散射法。通過實驗證明，該方法操作簡單、穩定性好，試劑廉價，靈敏度高和重現性好等優點，適合殼聚糖原料及復方樣品中殼聚糖含量的測定。

技術領域

本發明涉及一種共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，屬于大分子檢測領域。

背景技術

殼聚糖(CTS)是由甲殼素(Chitin)脫乙?；漠a物，它是目前已知的自然界唯一帶正電荷的堿性多糖，即以β(1,4)糖苷鍵串連的氨基葡萄糖線性大分子。殼聚糖具有復雜的雙螺旋結構，分子結構中因有OH、NH₂基團而具有較強的反應活性。由于它具有天然無毒和良好的生物降解性、生物相容性等生物活性,被廣泛應用于環保、醫藥、農業、化妝品和食品工業等領域。因此對殼聚糖含量測定的技術也越來越重視。

而目前測定殼聚糖的方法依然存在一些不足，如分光光度法、熒光猝滅法的靈敏度較低且干擾因素較多，只能達到mg/mL級別，而且選擇性不高；紅外光譜法對于樣品前處理要求較高，不能有任何損失，而且對于組成復雜的樣品還需扣除干擾，才能獲得較為準確的測定結果，且儀器較昂貴；電化學法測定殼聚糖雖然抗干擾能力較強，但因為操作較為繁瑣且選擇性也不高。高效液相色譜法(HPLC)儀器昂貴，不利于廣泛利用。而共振瑞利散射法具有靈敏度高、簡便、快速等優點，可以在普通的熒光光度計上實現測定，且可用于測定的探針種類繁多。

水溶性苯胺藍-殼聚糖體系的共振瑞利散射法已經基本建立起來，然而，關于溫度對體系的影響機理，表面活性劑和膠體保護劑對體系的作用，以及脫乙酰度和分子量對體系準確定量的影響等均未進行深入探討。溫度對體系的反應速率有影響；而表面活性劑有作為增敏劑、分散劑等作用，在一定條件下可能使散射強度增強；膠體保護劑可增強高分子聚合物溶液的穩定性，同時也可能起到增敏的作用；脫乙酰度和分子量不同是殼聚糖的兩個特征性質，標準品與樣品中殼聚糖的脫乙酰度和分子量可能存在差異，影響其準確測定。因而在此基礎上，對該體系的共振瑞利散射法進行優化研究，深入探討反應機理，對完善該方法的建立具有重要意義。

發明內容

為了克服現有技術中對于成品中殼聚糖的含量難以定量，操作技術繁瑣的技術不足，本發明提供一種共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，本發明利用一定條件下，加入一定量低濃度的膠體保護劑使體系更穩定，且在一定濃度范圍內，共振瑞利散射光譜增強值與殼聚糖的濃度成正比，以此作為殼聚糖的定量基礎，建立了測定殼聚糖的共振瑞利散射法。通過實驗證明，該方法操作簡單、穩定性好，試劑廉價，靈敏度高和重現性好等優點，適合殼聚糖原料及復方樣品中殼聚糖含量的測定。

一種共振瑞利散射法測定殼聚糖含量的方法，其包括下述步驟：

1)繪制△I和不同濃度的殼聚糖的標準曲線

向10mL比色管中加入1.0mL一定濃度梯度的殼聚糖標準溶液，2.0mL甘氨酸-鹽酸緩沖溶液，1.0mL濃度為1×10^-4mol/L苯胺藍溶液，再加入一定量的低濃度的膠體保護劑，使用蒸餾水定容后充分搖勻，100℃水浴加熱10min，冷卻至室溫，取1ml混合溶液加入石英比色皿，于F-2500型熒光分光光度計上，以λ_ex＝λ_em進行同步掃描，分別記錄含殼聚糖的各檢測體系在最大共振瑞利散射波長λ＝349nm處體系的共振散射強度值I，其中試劑空白在λ＝349nm處體系的共振散射強度值I₀，并計算△I＝I-I₀，建立△I與殼聚糖濃度的標準曲線C；