[發明專利]犬瘟熱病毒熒光EMA檢測引物組、試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 201711498541.1
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN107916304A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發明（設計）人: 譚卓;胡振新;郜安國
• 申請（專利權）人: 蘇州點晶生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司32232
• 代理人: 何蔚

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種犬瘟熱病毒熒光EMA檢測引物組、試劑盒和檢測方法。

背景技術

犬瘟熱(Canine Distemper)是由犬瘟熱病毒(Canine Distemper virus，CDV)引起的一種高度接觸性傳染病，傳染性極強，死亡率可高達80％以上，根據國家農業部于2008年12月11日公布的動物疫病名錄統計，犬瘟熱屬三類動物疫病，主要感染犬科及貓科動物，傳染渠道主要是通過與病獸直接接觸傳染，也可通過空氣或食物傳染，不屬于人畜共患病。

犬瘟熱在自然條件下，不同年齡、性別和品種的犬均可感染，但以未成年的幼犬最為易感。另有研究表明除犬科動物外，鼬科，浣熊科，大熊貓科等多種動物也可感染發病，是當前對寵物飼養業、毛皮動物養殖業和野生動物保護業危害最大的疫病之一。一旦犬群發生本病，除非在絕對隔離條件下，否則其他幼犬很難避免感染。

犬瘟傳統檢測手段主要為病毒分離培養，ELISA檢測，免疫試紙條檢測和RT-PCR檢測等，但在這些檢測方法中，病毒分離培養耗時較長，ELISA檢測和免疫試紙條檢測則存在靈敏度不高或特異性不強等問題，目前多項專利采用RT-PCR或LAMP方法，這些方法靈敏度和特異度都較高，但需要昂貴的儀器試劑，對操作者技術要求也較高，同時耗時較長，因此無法用于基層和現場檢測。

發明內容

為解決以上技術問題，本發明提供一種犬瘟熱病毒熒光EMA檢測引物組、試劑盒及檢測方法，特異性強、準確率高，操作簡單、時間短、儀器要求低，能夠實現快速、準確、低成本地檢測犬瘟熱病毒。

為達到上述目的，本發明的技術方案是：犬瘟熱病毒熒光EMA檢測引物組，包含上、下游引物和探針，所述上游引物是：5’-AAATCTGGCTTGATATTGTTAG-3’；所述下游引物是：5’-GAGCCGGATACATAGTTTCAA-3’；所述探針是5’-CCCCAGGGAACAAGCCTAC/i6-FAMdT/GA/idSp/A/iBHQ1dT/GATTTGT-3’ C3 Spacer。其中：“i6-FAMdT”指6-FAM(6-羧基熒光素)熒光標記的dT核苷酸，“idSp”指堿基缺失，“iBHQ1dT”指帶有BHQ1淬滅基團標記的dT核苷酸，“C3 Spacer”指3’羥基封閉。

其中，所述引物組中的上、下游引物和探針可以是與權利要求1所述上、下游引物和探針的序列同源性大于85％的序列；或者是與權利要求1所述上、下游引物和探針的序列堿基互補的序列。

本發明還提供犬瘟熱病毒熒光EMA檢測試劑盒，所述試劑盒包括以下內容：

(1)復溶液；

(2)含引物的凍干酶管；所述引物包含上、下游引物和探針，所述上游引物是：5’-AAATCTGGCTTGATATTGTTAG-3’；所述下游引物是：5’-GAGCCGGATACATAGTTTCAA-3’；所述探針是5’-CCCCAGGGAACAAGCCTAC/i6-FAMdT/GA/idSp/A/iBHQldT/GATTTGT-3’ C3 Spacer；

(3)陽性對照品；

(4)陰性對照品。

其中，所述復溶液的成分如下：每30ml復溶液中含0.1-2M的MgAc₂ 840μL、0.1-2M pH8.0的Tris-Ac 3.00mL、0.1-2M的DTT 150μL、無RNase水26.01ml。

優選的，所述復溶液的成分如下：每30ml復溶液中含1-2M的MgAc₂ 840μL、1-2M pH8.0的Tris-Ac 3.00mL、1-2M的DTT 150μL、無RNase水26.01ml。