[發(fā)明專利]一種解酒護(hù)肝的復(fù)合微生物飲品及其制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201711497234.1 | 申請(qǐng)日： | 2017-12-31 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108094794B | 公開（公告）日： | 2021-01-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 蔣常德;蔣常銀 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 佛山市艷暉生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | A23L2/38 | 分類號(hào)： | A23L2/38;A23L33/00;A01C1/00;C12N1/20;C12N1/14;C12R1/125;C12R1/01;C12R1/69 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 528000 廣東省佛山市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 解酒 復(fù)合 微生物 飲品 及其 制備 方法 | ||
1.一種解酒護(hù)肝的復(fù)合微生物飲品，其特征在于，該復(fù)合微生物飲品由枯草芽孢桿菌發(fā)酵液30-40份，桃紅莢硫菌發(fā)酵液30-40份，米根霉發(fā)酵液30-40份混合而成；該復(fù)合微生物飲品具體的制備方法，包括以下步驟：
步驟一, 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制備
、取出菌種保藏管，用LB固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37℃培養(yǎng)48小時(shí)，在平板下挑取單個(gè)菌落接種50毫升LB培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37℃震蕩培養(yǎng)24小時(shí)，種子采用5%的接種量，接種至裝液量為2L LB培養(yǎng)基的5L大三角瓶中， 37℃震蕩培養(yǎng)20-28小時(shí)，檢測其菌液濃度，活菌含量超過30億/毫升，即可作為枯草芽孢桿菌液體菌種；
、將步驟培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌液體菌種作為種子，接種至600L發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為10%，開攪拌120r/min，每分鐘通氣量液氣比1：0.8，37℃培養(yǎng)24-36小時(shí)，待芽孢含量不低于100億/毫升，即可結(jié)束發(fā)酵，作為枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；
其中，所述LB培養(yǎng)基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，水1000mL，pH7.2，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%；
其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米黃粉40 g/L，葡萄糖10g/L，葛根粉40 g/L， 蛋白胨8 g/L，硫酸鎂0.3 g/L，硫酸錳0.2 g/L，磷酸二氫鈉0.5 g/L，磷酸氫二鈉2.3 g/L，pH7.2；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；
其中，所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）JCD-H-16，該菌種已由本發(fā)明的專利權(quán)人在北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)為CGMCC NO．13663保藏日期為2017年2月16日；
步驟二，桃紅莢硫菌發(fā)酵液的制備
、半固體種子活化培養(yǎng)：將桃紅莢硫菌種穿刺在半固體紫硫光合細(xì)菌培養(yǎng)基中，25-35℃光照培養(yǎng)7-10天，待穿刺的菌線變紅并長出菌苔，即可為活化的菌種
、種子培養(yǎng)：將活化的菌種接種至種子液體培養(yǎng)基中，溫度25-35℃，光照強(qiáng)度為：1000-3000lux，光照厭氧培養(yǎng)7-10天，檢測種子的OD650≥1.2，活菌數(shù)≥6億CFU/mL即為種子培養(yǎng)液；
、發(fā)酵培養(yǎng)：將種子培養(yǎng)液與桃紅莢硫菌發(fā)酵培養(yǎng)基以1：4的接種量接種，在光照培養(yǎng)罐中厭氧培養(yǎng)7-10天，培養(yǎng)溫度25-35℃，光照強(qiáng)度為：1000-4000lux，攪拌速度為50轉(zhuǎn)/分鐘，待檢測其OD650≥4，活菌數(shù)≥10億CFU/mL，多糖含量達(dá)到5 g/L，即為桃紅莢硫菌發(fā)酵液；
其中，所述的半固體紫硫光合細(xì)菌培養(yǎng)基為：氯化銨0.6g/L，磷酸二氫鉀0.6g/L，二水氯化鈣0.08g/L，氯化鎂0.3g/L，果糖2g/L，醋酸鈉2 g/L，蘋果酸鈉1g/L，九水硫化鈉0.2g/L，瓊脂10g/L，121℃滅菌15分鐘，用醋酸調(diào)pH至7.0-7.2，其中九水硫化鈉先配制成0.1g/mL單獨(dú)滅菌；
其中，所述的種子液體培養(yǎng)基為：氯化銨0.6g/L，磷酸二氫鉀0.8g/L，二水氯化鈣0.05g/L，氯化鎂0.3g/L，果糖2g/L，醋酸鈉2 g/L，甘油0.5g/L，九水硫化鈉0.2g/L，121℃滅菌15分鐘，用醋酸調(diào)pH至7.0-7.2，其中九水硫化鈉先配制成0.1g/mL單獨(dú)滅菌；
其中，所述的桃紅莢硫菌發(fā)酵培養(yǎng)基為：玉米黃粉20 g/L，氯化銨0.5g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，二水氯化鈣0.1g/L，氯化鎂0.4g/L，果糖20g/L，醋酸鈉2 g/L，蜂蜜10g/L，硫代硫酸鈉1g/L，121℃滅菌15分鐘，用醋酸調(diào)pH至7.0-7.2；
其中，桃紅莢硫菌由本發(fā)明人保藏在中國普通微生物菌種管理中心，編號(hào)為CGMCC10344，保藏日期為2015年1月12日；
步驟三，米根霉發(fā)酵液的制備
、取出米根霉菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，28℃培養(yǎng)5天，在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)5-7天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為1億CFU/mL，即為米根霉種子液；
發(fā)酵：將上述制備的米根霉種子液以2%的接種量接種至裝有300L米根霉發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌200r/min，前8小時(shí)通氣量為120L/min，8-24小時(shí)后通氣量為240L/min ，24小時(shí)后通氣量為360L/min ，30℃培養(yǎng)48-72小時(shí)，待菌體含量達(dá)到60g/L，即可停罐，即可作為米根霉發(fā)酵液；
其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；
其中，所述的米根霉發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米黃粉40 g/L，葡萄糖10g/L，葛根粉40 g/L，大豆分離蛋白粉10 g/L，硫酸鎂0.3 g/L，硫酸錳0.2 g/L，磷酸二氫鉀0.5 g/L， pH7.2；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；
其中，米根霉菌種是購自中國普通微生物菌種保藏管理中心，編號(hào)為CGMCC 3.5085；
步驟四，將前面制備的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液30-40份，桃紅莢硫菌發(fā)酵液30-40份，米根霉發(fā)酵液30-40份混合而成 ，檢測其多糖含量不低于1.5 g/L，芽孢含量不低于20億CFU/mL，即可灌裝，作為復(fù)合微生物飲品。
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