[發(fā)明專利]一種促進人臍帶間充質(zhì)干細胞增殖的多糖組合物及其應(yīng)用

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• 申請日: 2017-12-31
• 公開（公告）號: CN108251363A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 向雙林;黃招琴;彭海寧;楊滿君;顏峰;胡翔
• 申請（專利權(quán)）人: 南華生物醫(yī)藥股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28
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本發(fā)明公開了一種麥冬多糖和白術(shù)多糖組合物及其制備方法，并公開了上述麥冬多糖和白術(shù)多糖組合物在促進人臍帶間充質(zhì)干細胞體外增殖的應(yīng)用。本發(fā)明所述藥物組合可以使間充質(zhì)干細胞保持較高活性，增殖速度大幅度提高，并且防止其分化。應(yīng)用本發(fā)明制備的臍帶間充質(zhì)干細胞對科學(xué)研究與臨床應(yīng)用具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種多糖組合物的制備與用途，具體涉及麥冬多糖與白術(shù)多糖組合物在促進人臍帶間充質(zhì)干細胞增殖方面的用途。

背景技術(shù)

人臍帶間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種具有全能干細胞特點的細胞，是中胚層發(fā)育的早期細胞，可向中胚層和外胚層來源的組織分化，具有多向分化潛能，其形態(tài)和生物學(xué)特點與骨髓源性MSCs相似（Br JHaematology,2000,109:235-242）。臍帶間充質(zhì)干細胞（MSCs）具有較高的分化潛能，在一定的實驗條件下可分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、神經(jīng)細胞、肝細胞、骨骼肌細胞等(Blood,2004,103:1669-1675)。從人臍帶中分離出MSCs，其細胞含量、擴增能力優(yōu)于骨髓MSCs，免疫原性比骨髓MSCs低，并且具有取材方便，無倫理學(xué)爭議等優(yōu)點，可作為一種新的替代細胞來源，用于各系統(tǒng)疾病的細胞移植及基因治療。

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬的干燥塊根、具有養(yǎng)陰生津、潤肺清心之功效（中國藥典.2015:155-156）。麥冬主要含甾體皂苷、高異黃酮、多糖等活性成分。麥冬中含有大量的多糖類成分，并由單糖與低聚糖類化合物組成。文獻報道，麥冬多糖經(jīng)水解之后主要由果糖組成，其果糖與葡萄糖的比例為35∶1（中草藥，2005，36(5):1488）。現(xiàn)代藥理研究表明麥冬多糖具有廣泛的藥理作用，包括降糖作用、抗心肌缺血和心肌梗塞作用、對肌體免疫系統(tǒng)的作用、抗氧化作用、抗腫瘤作用、外分泌腺保護作用等。麥冬多糖含量較高，提取工藝相對簡單。

白術(shù)為菊科植物白術(shù)的干燥根莖，性溫，味甘苦，具有健脾、益氣等作用。白術(shù)多糖(PAM)是白術(shù)的主要活性成分，主要是由葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖組成的雜多糖，具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化及抗衰老、抗腫瘤、降血糖等作用（中藥材，2006:107–109）。

目前人臍帶間充質(zhì)干細胞已廣泛應(yīng)用于各種基礎(chǔ)研究及疾病治療的臨床實驗，但目前所使用的培養(yǎng)方案各異，培養(yǎng)效果并不穩(wěn)定，常出現(xiàn)干細胞生長速度慢、形態(tài)改變導(dǎo)致性狀改變、細胞活率降低等問題。本發(fā)明的目的是提供一種能促進人臍帶間充質(zhì)干細胞增殖的多糖組合物，用于獲得穩(wěn)定可靠的人臍帶間充質(zhì)干細胞。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人在實驗中發(fā)現(xiàn)，麥冬多糖與白術(shù)多糖組合物在合適配比和濃度下對人臍帶間充質(zhì)干細胞具有促進增值作用，促進體外培養(yǎng)的臍帶間充質(zhì)干細胞的增殖能力，增強細胞活性。本發(fā)明提供的多糖組合物可以作為人臍帶間充質(zhì)干細胞增殖促進劑以及用于制備促進人臍帶間充質(zhì)干細胞增殖的藥物，也可為人臍帶間充質(zhì)干細胞增殖機理的研究提供大量干細胞。

本發(fā)明首先是提供一種麥冬多糖與白術(shù)多糖組合物的制備方法，該制備方法工藝簡單，提取效率高。該技術(shù)方案以麥冬多糖與白術(shù)多糖為原料，經(jīng)水提取和乙醇處理后制備獲得。

在上述制備方法中：本發(fā)明所述麥冬與白術(shù)的重量份配比為300-100: 100；佳選為300:100。本發(fā)明水提取時，每次提取時水的用量為原料總重量的5-20倍，提取2-3次，每次提取時間為1-2h。本發(fā)明水提取后，過濾后將濾液濃縮，所得濃縮液采用體積百分含量為60-95%的乙醇水溶液進行醇沉處理，獲得沉淀物即為麥冬多糖與白術(shù)多糖組合物。其中濃縮優(yōu)選冷凍真空濃縮。

本發(fā)明所述的多糖組合物包括麥冬多糖與白術(shù)多糖。按照前述方法提取出麥冬多糖與白術(shù)多糖，其優(yōu)選組合比例為3∶1。