[發明專利]一種基于Rbm24基因獲得干細胞源骨骼肌細胞的方法

在審

• 申請號: 201711496014.7
• 申請日: 2017-12-31
• 公開（公告）號: CN109988768A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 徐秀琴;韓月
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

一種基于Rbm24基因獲得干細胞源骨骼肌細胞的方法，涉及干細胞再生醫學與藥物。所述基于Rbm24基因序列構建的表達載體包括其核苷酸序列如序列表所示的Rbm24基因、熒光報告基因以及抗生素篩選基因。所述干細胞為胚胎干細胞或誘導多能性干細胞。所述Rbm24基因轉染多能性干細胞在促進多能性干細胞向骨骼肌分化中的應用。所述Rbm24基因感染多能性干細胞在促進多能性干細胞向骨骼肌分化中的應用。構建含有編碼RNA結合蛋白Rbm24的基因序列的轉染載體；將構建的轉染載體轉染到干細胞中；轉染后，用骨骼肌定向分化誘導液進行誘導分化，直至獲得成熟的骨骼肌細胞。

技術領域

本發明涉及干細胞再生醫學與藥物，尤其涉及一種基于Rbm24基因獲得干細胞源骨骼肌細胞的方法。

背景技術

基于干細胞的再生醫學為生命科學、醫學與藥物研發的發展開辟了一個嶄新的、廣闊的領域。研究者認為干細胞(再生醫學)研究有潛力通過修復特定的組織或器官，改變人類對疾病的應對方法。干細胞再生醫學在治療骨骼肌病等目前尚無良好治療方案的疾病方面具有廣泛的應用前景。

干細胞是原始未分化的細胞，具有分化為其他細胞類型的能力。根據來源不同，可將干細胞分為多能干細胞和來自成熟組織的干細胞。多能干細胞是指具有無限增殖、多分化潛能的一類干細胞，包括胚胎干細胞(embryonic stem cells,ESC)和誘導型多能干細胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)。ESC是指從桑椹胚或附植前囊胚內細胞團分離出的多潛能細胞；iPSC是將4種轉錄因子Oct4，Sox2，c-myc和Klf4組合導入體細胞，將分化的體細胞重編程，轉變為ESC樣細胞。這些多能干細胞，在給予合適的信號或合適的培養環境下，可分化為具有不同形態和功能的成熟細胞。雖然研究證實干細胞可分化為骨骼肌樣細胞[1]，但分化的骨骼肌樣細胞的成活度和效率還有待提高[2]。因此促進干細胞分化成為有功能的成熟的骨骼肌細胞成為急需解決的問題。

骨骼肌細胞的分化受很多因子的調控影響，其中成肌細胞調節因子MRFs家族(MyoD、Myf5、MRF4、Myogenin)，能與骨骼肌特異性基因啟動子上的特定DNA序列結合，激活這些骨骼肌特異基因的表達，對骨骼肌的發育成熟起著至關重要的作用。其中，MyoD和Myf5在干細胞分化為成肌細胞過程中起著重要作用，而Myogenin在肌纖維的成熟及形態方面起重要作用[3、4]Rbm24是一種RNA結合蛋白，特異性的表達在心臟和骨骼肌中，有研究表明，Rbm24在斑馬魚，小鼠的早期胚胎發育中，參與骨骼肌的早期形成[5]。Yang等報道在Rbm24的敲除鼠中，小鼠體節發育缺陷，M-band消失[6]，表明Rbm24在骨骼肌發育中起重要調控作用。且在C2C12細胞中，Rbm24可調節Myogenin的轉錄和表達，對C2C12細胞來源的肌管形成中有著重要的作用[7]。我們實驗發現，ESC來源的骨骼肌細胞中高表達Rbm24,并且Rbm24的過表達可以通過肌肉特異性的可變剪切，促進ESC向骨骼肌分化，這為重建和再生受損的骨骼肌，以及治療肌萎縮等骨骼肌疾病提供了新的方案。

參考文獻：

1.Salani,S.,et al.,Generation of skeletal muscle cells from embryonicand induced pluripotent stem cells as an in vitro model and for therapy ofmuscular dystrophies.J Cell Mol Med,2012.16(7):p.1353-64.

2.Bhagavati,S.and W.Xu,Generation of skeletal muscle fromtransplanted embryonic stem cells in dystrophic mice.Biochem Biophys ResCommun,2005.333(2):p.644-9.