[發明專利]一種脂肪來源的脂肪干細胞的分離擴增方法及其應用

在審

• 申請號: 201711490601.5
• 申請日: 2017-12-30
• 公開（公告）號: CN109988747A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 劉建強;何曉;艾霞
• 申請（專利權）人: 西安洛威塔生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61L27/38
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種脂肪來源的脂肪干細胞的分離擴增方法，其特征在于，包括如下步驟：

脂肪組織選?。涸跓o菌條件下從大腿內側或腹部抽取脂肪組織20～30ml；

酶消化法從脂肪組織中獲得脂肪干細胞：在超凈工作臺無菌環境下，在抽取的脂肪組織中，加入兩倍體積的1～5mg/mL I型膠原蛋白酶，37度下消化1h，將消化液在800轉離心下，離心5分鐘，棄上清液，用含有EGF、bFGF及PRP的DMEM/F12培養基重懸細胞；

擴增脂肪干細胞：在DMEM/F12培養基中加入表皮細胞生長因子（EGF）、堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）及富含血小板的血漿（PRP），在35～37℃、濃度1～5%二氧化碳培養箱中培養脂肪干細胞，所述堿性細胞生長因子的濃度為：EGF活力單位為50～200U/mL，bFGF活力單位為100～500U/mL，所述富含血小板的血漿，是自體全血經離心后得到的血小板濃縮物，將其加入DMEM/F12培養基中，其血漿最終濃度為5～20%。

2.一種脂肪來源的脂肪干細胞的分離擴增方法，其特征在于，包括如下步驟：1）無菌條件下，從大腿內側或腹部抽取脂肪組織，按體積比例1:2加入5mg/mL的I型膠原蛋白酶，37度下消化1h，將消化液在800轉離心下，離心5分鐘，棄上清液；

2）用含有EGF、bFGF及PRP的DMEM/F12培養基重懸細胞，在37度、5%二氧化碳濃度下，在培養箱中培養8天，其中EGF活力單位為50U/mL，bFGF活力單位為100U/mL，PRP的濃度為10%。

3.根據權利要求1～2任意一項權利要求制得的擴增的脂肪干細胞的應用，其特征在于，將擴增的脂肪干細胞與新鮮脂肪組織混勻，制備成脂肪注射液。

4.根據權利要求3制得的擴增的脂肪干細胞的應用，其特征在于，所述制備成脂肪注射液，脂肪干細胞的終濃度為1×10⁶細胞/ml。