[發明專利]人miRNA-493-3p的抑制劑在制備治療腎纖維化藥物中的應用

在審

• 申請號: 201711490076.7
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108452307A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 杜銳;劉利敏;康靜波;吳垚;溫居一;張新紅;鄭偉;方恒虎;吳珊珊;李東
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學;中國人民解放軍海軍總醫院
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K31/713;A61P13/12;C12Q1/6883
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

本發明公開了人miRNA?493?3p的抑制劑在制備治療腎纖維化藥物中的應用。在本發明中，我們探討了miR?493?3p在G2/M期阻滯和腎纖維化中的作用，并探討了其作用機制。這些結果表明miR?493?3p在缺氧條件下通過抑制下游分子STMN1在體內和體外誘導的腎小管細胞G2/M期阻滯。消除G2/M阻滯和阻斷miR?493?3p?STMN1途徑將對新型的抗纖維化治療提供未來發展的新方向。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及人miRNA-493-3p的抑制劑在制備治療腎纖維化藥物中的應用。

背景技術：

腎臟纖維化是慢性腎病(chronic kidney diseases，CKD)進展到終末期腎病(end-stage renal disease，ESRD)的常見病理改變。該過程主要涉及肌成纖維細胞活化，產生大量的膠原蛋白。目前已經提出了關于腎纖維化起源的多種假設：成纖維細胞增殖，骨髓募集，血管周細胞生成，內皮細胞肌成纖維細胞轉化(endothelial-myofibroblasttransition,En-MT)和上皮間質轉化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)，這些均促進了肌成纖維細胞的生成增加，從而導致腎纖維發生。缺氧是終末期腎衰竭和腎臟疾病進展的始動因素。越來越多的證據表明缺氧在腎纖維化中起著至關重要的作用，但其作用機制尚未明確。細胞停滯在G2/ M期可促進轉化生長因子-β1(TGF-β1)，結締組織生長因子(CTGF)Collagen4A1(COL4A1)，α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的增加進而引起腎纖維化。Lovisaet al.提示TGF-β1介導的EMT 程序誘導與p21介導的G2期細胞周期停滯相關，而且p21在EMT誘導的腎小管上皮細胞 (TECs)的細胞周期阻滯中起調節作用。另一項研究顯示即細胞周期調控蛋白如p53，p21， p16等可以減輕急性缺血和腎毒性藥物性腎損傷，延緩腎纖維化。然而，目前還沒有研究表明缺氧是否可以通過調控腎小管上皮細胞G2/M期阻滯導致腎纖維化。

MicroRNA是一類通過抑制靶mRNA轉錄和翻譯來調節基因表達或促進mRNA降解的內源性非編碼RNA。

STMN1是一種細胞周期調控因子，編碼stathmin1蛋白，這是一種微管調控因子，可促進微管失穩，對正確形成有絲分裂紡錘體發揮重要作用。

發明內容：

本發明的目的是提供人miRNA-493-3p的抑制劑在制備治療腎纖維化藥物或腎小管上皮細胞G2/M期阻滯藥物中的應用。

我們使用基因芯片分析了缺氧條件下HK2細胞的microRNA表達比例，發現miR-493-3p 在缺氧誘導的HK2細胞中表達顯著增加，進一步證實在單側輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠模型、缺血再灌注模型(unilateralischemia reperfusion model,UIRI) 和IgA腎病患者(IgA nephropathy,IgAN)腎組織中miR-493-3p表達增加。我們發現缺氧可誘導腎小管細胞發生G2/M期阻滯，從而導致腎纖維化，microRNA可參與調控。我們比較了缺氧條件下HK2細胞中microRNAs的表達，并在缺氧24和48小時后鑒定發現miR-493-3p 的上升顯著。并且miR-493-3p在慢性腎臟病患者腎組織中表達顯著高于正常腎組織。 miR-493-3p的高表達降低了HK2細胞中細胞周期調控因子STMN1的表達，增加了G2/M 期細胞和促分裂因子的百分比。用sh-RNA靶向STMN1產生與miR-493-3p的過表達相似的效果。miR-493-3p抑制劑在體外動物模型逆轉這些作用。與這些結果一致，miR-493-3p海綿腺相關病毒(Adeno-associated virus，AAV)在體內降低profibotic因子和stathmin1的表達。總之，我們的研究結果表明，miR-493-3p-stathmin通路的激活促進缺氧誘導的腎小管上皮細胞G2/M阻滯和腎纖維化。消除G2/M阻滯和阻斷miR-493-STMN1途徑將為新的抗纖維化治療的未來發展提供新的見解。