[發明專利]一種對引物測序的方法有效
| 申請號： | 201711490028.8 | 申請日： | 2017-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN107937503B | 公開（公告）日： | 2018-10-26 |
| 發明（設計）人： | 竇坤 | 申請（專利權）人： | 北京睿博興科生物技術有限公司廣州分公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6869 | 分類號： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙) 44387 | 代理人： | 顏春艷 |
| 地址： | 510535 廣東省廣州市黃*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 引物 測序 對引物 通用引物 基因工程 檢測結果 生物診斷 藥物研發 質粒模板 堿基 可用 研發 應用 | ||
1.一種對引物測序的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟一：在擴增體系中，以引物Z和引物Y2作為PCR引物對，將質粒模板DNA經PCR擴增出模板DNA1，然后采用瓊脂糖凝膠電泳法回收模板DNA1；
步驟二：在擴增體系中，以引物X和引物Y2作為PCR引物對，將模板DNA1經PCR擴增出待測DNA2，然后采用瓊脂糖凝膠電泳法回收待測DNA2；
步驟三：將待測DNA2的原液稀釋至濃度為2.5～5ng/ul，然后，使用引物Y2對待測DNA2進行Sanger法測序，即測得引物X的序列；
其中，所述引物X為待測序的引物；所述引物Y2為一條已知的通用引物；所述引物Z由所述引物X的3'端連接引物Y1構成，所述引物Y1為另一條已知的通用引物；
其中，所述步驟一中的擴增體系包含：
其中，所述步驟二中的擴增體系包含：
2.根據權利要求1所述的對引物測序的方法，其特征在于，所述模板DNA1為200～700bp的DNA片段。
3.根據權利要求1所述的對引物測序的方法，其特征在于，所述待測DNA2為700～800bp的DNA片段。
4.根據權利要求1所述的對引物測序的方法，其特征在于，所述步驟一和所述步驟二中各自實施的PCR擴增的反應程序為：
預變性：95℃ 5min
循環30次：95℃ 變性30s
55～65℃ 退火30s
72℃ 延伸30～40s
末次延伸：72℃ 7min
4℃ hold。
5.根據權利要求1所述的對引物測序的方法，其特征在于，在所述步驟一采用的瓊脂糖凝膠電泳法中，瓊脂糖凝膠的質量體積濃度為0.8％。
6.根據權利要求1所述的對引物測序的方法，其特征在于，在所述步驟二采用的瓊脂糖凝膠電泳法中，瓊脂糖凝膠的質量體積濃度為1.8％。
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