[發明專利]一種定量sST2的Elisa檢測試劑盒及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201711487046.0
• 申請日: 2017-12-30
• 公開（公告）號: CN108181469A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 陳香;羅峰;姚遠
• 申請（專利權）人: 廣州博富瑞醫學檢驗有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

1.一種定量sST2的Elisa檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包含有sST2稀釋液、洗滌液、檢測抗體、顯色液、終止液、多個不同濃度的sST2標準品、sST2質控品和微孔反應板，所述微孔反應板包被了sST2單克隆捕獲抗體；所述的檢測抗體為生物素山羊抗人sST2單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述定量sST2的Elisa檢測試劑盒，其特征在于，所述的多個不同濃度的sST2標準品為八個不同濃度的標準品。

3.根據權利要求2所述定量sST2的Elisa檢測試劑盒，其特征在于，所述的八個不同濃度sST2標準品的濃度為0pg/ml、62.5pg/ml、125pg/ml、250pg/ml、500pg/ml、1000pg/ml、2000pg/ml、4000pg/ml。

4.根據權利要求3所述的定量sST2的Elisa檢測試劑盒，其特征在于，所述的sST2標準品是R&D公司的Human Standard與稀釋液配制而成。

5.根據權利要求4所述定量sST2的Elisa檢測試劑盒，其特征在于，所述的sST2稀釋液為1×稀釋液。

6.根據權利要求1所述的定量sST2的Elisa檢測試劑盒，其特征在于，所述的洗滌液為0.05％的Tween20加入適量的PBS緩沖液配置而成的TPBS溶液。

7.根據權利要求1所述的定量sST2的Elisa檢測試劑盒，其特征在于，所述質控品是搜集臨床15例aGVHD陰性樣本，收集血清后混合而成的。

8.制備權利要求1所述的sST2的Elisa檢測試劑盒的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)制備稀釋液:取10×稀釋劑濃縮液用超純無菌水按1:10比例稀釋待用；

2)制備定量sST2的Elisa檢測試劑盒標準品和質控品：使用稀釋液將人致癌抑制因子2標準品稀釋得到八個濃度的sST2標準品，同時使用臨床aGVHD陰性樣本血清混合物作為質控品；

3)制備洗滌液：取適量Tween 20加入磷酸鹽緩沖溶液PBS，配制成體積分數為0.05％的TPBS；

4)制備sST2單克隆捕獲抗體工作液：取適量Human ST2捕獲抗體粉末溶解于適量pH為7.2-7.4的磷酸鹽緩沖液中，溶解成120ug/ml的保存液，-20℃保存。再以同樣的緩沖液120倍稀釋成CAW使用；

5)制備sST2單克隆檢測抗體工作液：取適量的Human ST2檢測抗體粉末，于1ml的稀釋液溶解成2ng/ml的保存液，再進行100倍稀釋；

6)制備Stand工作液：取55ng的人致癌抑制因子2標準品溶于0.5ml稀釋液配成110ng/ml的保存液；再以40ul的SAS溶于1060ul的稀釋液，配置成4000pg/ml的最大濃度工作液，再依次稀釋成濃度為2000pg/ml，1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml；

7)制備HRP工作液：取1ml的HRP原液加入39ml的稀釋液配置成40×的HRP稀釋液，再取上述溶液與稀釋液配置成1×的HRP工作液；

8)制備終止液：量取10mL質量分數為18mol/L的濃硫酸沿燒杯壁緩慢注入170ml的蒸餾水中混勻，即按1:18倍稀釋；或自選濃度為1mol/L的2N H₂SO₄作為終止液；

9)制備sST2單克隆抗體包被的微孔反應板：取適量Human ST2單克隆捕獲抗體，加入磷酸鹽緩沖液溶解成終濃度為120ug/ml的CAS保存液，-20℃儲存備用；取微孔板，每孔加入50ul稀釋后的sST2單克隆捕獲抗體工作液CAW，覆膜后置于暗室，在20-22℃放置16-20h，甩去孔內液體，倒扣在吸水紙上拍干；用TPBS清洗2次,甩去孔內液體，用吸水紙拍干；加入150ul稀釋液，室溫放置1h，甩去板內液體，拍干孔板，加入150ul含2％的蔗糖的PBS溶液SP，室溫放置5-10min；甩去板內液體，拍干孔板，倒扣孔板在干凈的空間里干燥2h；將孔板放置在鋁箔袋中，20-22℃放置過夜次日檢測使用，或保存于-20℃保存待用。

9.權利要求1所述的定量sST2的Elisa檢測試劑盒用于檢測造血干細胞移植術后急性移植物抗宿主病aGVHD。