[發明專利]一種腸道菌群樣本常溫保存液及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201711482107.4
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108192827A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 覃俊杰;楊仁濤;付志聰
• 申請（專利權）人: 深圳譜元科技有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/01
• 代理公司: 深圳市精英專利事務所 44242
• 代理人: 張慧

本發明屬于分子生物學腸道菌群領域，具體涉及一種腸道菌群樣本常溫保存液及其制備方法和用途。包括如下組分：卡松防腐劑、乙二胺四乙酸二鈉、Tris?HCl緩沖液、氯化鋰、乙醇和無菌水；卡松防腐劑質量份數為0.2?1‰；乙二胺四乙酸二鈉的摩爾份數為1?10mM；Tris?HCl緩沖液的摩爾體積份數為5?20mM；氯化鋰的摩爾體積份數2mol/L；乙醇的體積份數為95％；無菌水的體積分數為0?3％。所述的保存液可常溫保存、運輸腸道菌群樣本；將采集的腸道菌群樣本浸沒在保存液中，常溫條件下能維持樣本中微生物結構組成的穩定。因此可由受檢者在任何時候都可完成樣本采集和保存，同時也方便樣本的常溫運輸。

技術領域

本發明屬于分子生物學腸道菌群領域，具體涉及一種腸道菌群樣本常溫 保存液及其制備方法和用途。

背景技術

腸道菌群，即人體腸道微生物的總稱。腸道不僅是人體消化吸收的重要 場所，同時也是最大的免疫器官，在維持正常免疫防御功能中發揮著極其重 要的作用。人體腸道為微生物提供了良好的棲息環境，成人腸道內的微生物 數量高達10^14個，接近人體體細胞數量的10倍；質量達到1.2kg，接近人 體肝臟的質量；其包含的基因數目約是人體自身的100倍，具有人體自身不 具備的代謝功能。這些微生物與人體共生，以人體攝入的食物以及腸道分泌 物為食，合成必須氨基酸，維生素，短鏈脂肪酸等重要物質進入人體，促進 宿主健康；相反，其中一些病原菌也分泌有害物質進入體內，損害宿主的健 康。由于腸道菌群的復雜和多樣性，人類對其結構多樣性和功能重要性一直 缺乏足夠的認知。直至近幾年，隨著第二代測序等技術的發展，人們可以對 整個腸道菌群作為一個整體，對它所包含的所有基因進行分析。這個基因的 大集合，就被稱作宏基因組。根據研究，這個基因組所包含的基因多達數百 萬，是人類基因組的100倍之多，其中包含多個與物質代謝、免疫、信號相 關的基因群體。通過對腸道菌群宏基因組的研究，有助于進一步挖掘腸道菌 群功能，更深層次的探究腸道菌群和人體健康的關系。進一步研究發現，腸 道微生物與大量的疾病直接相關，甚至在許多疾病中扮演了病因的角色。并 且，其中大量的疾病，例如肥胖，糖尿病，動脈粥樣硬化，炎癥性腸炎等都 是高發病率重要公共衛生問題。

由于腸道微生物寄居在人體的腸道內，因此最便捷，也是目前采用的最主要的 方式是研究人體排出的糞便的微生物，以此代表大腸內的共生微生物。糞便采集之 后，通過提取細菌的總DNA，擴增核糖體16S rRNA可變區并測序，經過一系列生 物信息學分析，可以了解糞便中的細菌構成，進一步研究其和人體健康疾病之間的 關系。

糞便排出后，環境發生了極大的變化。無氧環境轉變成有氧環境，其中的部分 細菌還保持了活性，繼續維持代謝和生長，而由于環境的變化，不同細菌其增長與 死亡的速率已經不同于排便前。因此，為了保證樣本采集的準確性，需要對糞便進 行一些保存措施，盡量將其中微生物的總量、組成、相對豐度等固定在剛剛離體時 的狀態，從而最好的代表大腸中的共生微生物。

目前采用的保存方法為采集糞便后立即凍存于-20℃或者-80℃的冰箱中，且一般認為-80℃可長期有效保存菌群樣品。由于細菌在低溫狀態下代謝速率極大的降 低，因此可以在一段時間內維持糞便中細菌的構成。此種保存方法最大的缺陷，就 是所要求凍存條件在很多情況下難以實現。如受檢者自行采樣，在樣本采集完成后 到樣本凍存這一段時間，由于保存條件、物流環境等因素，樣本中菌群結構及豐度 可能已經發生很大變化，樣本再用于檢測實驗已經無法保證準確性。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于克服現有技術的瓶頸，從而提出 一種保存液配方，使用此保存液，將采集的腸道菌群樣本浸沒在保存液中， 常溫條件下能維持樣本中微生物結構組成的穩定。因此可由受檢者在任何時 候都可完成樣本采集和保存，同時也方便樣本的常溫運輸。