[發明專利]一種重組釀酒酵母菌株及其應用和生產酪醇和/或紅景天苷的方法

有效

• 申請號: 201711479443.3
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN109988722B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 劉濤;江晶潔;殷華;莊以彬;馬延和
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12P7/22;C12P19/44;C12R1/865
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種生產酪醇和/或紅景天苷的重組釀酒酵母菌株，其特征在于，重組釀酒酵母菌株中外源基因包括AROL基因、PcAAS基因、AtUgt85A1基因、ARO4*基因和ARO7*基因；

所述ARO4*基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：1所示；所述ARO7*基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：2所示。

2.根據權利要求1所述的重組釀酒酵母菌株，其特征在于，所述外源基因整合在釀酒酵母菌株基因組上。

3.根據權利要求2所述的重組釀酒酵母菌株，其特征在于，所述外源基因以TEF1-AROL-CYC1t，TDH3-ARO7*-TEF1t，PGK1-ARO4*

-ADH1t和TDH3-PcAAS-TEF1t-PGK1-AtUgt85A1-ADH1t為整合片段的形式整合在釀酒酵母菌株基因組上。

4.根據權利要求1所述的重組釀酒酵母菌株，其特征在于，所述PcAAS、AtUgt85A1、ARO4*、ARO7*和AROL基因以重組質粒的形式在釀酒酵母中表達。

5.根據權利要求4所述的重組釀酒酵母菌株，其特征在于，所述外源基因以重組質粒的形式轉入釀酒酵母菌種，所述外源基因包含在兩個重組質粒中；其中第一重組質粒包含有ARO4*、ARO7*和AROL基因；第二重組質粒包含有PcAAS和AtUgt85A1。

6.根據權利要求5所述的重組釀酒酵母菌株，其特征在于，所述第一重組質粒為pESC-URA3-TEF1-AROL-TDH3-ARO7*-PGK1

-ARO4*；所述第二重組質粒為pESC-LEU2-TEF1-TDH3-PcAAS-

PGK1-AtUgt85A1。

7.權利要求1～6任意一項所述的重組釀酒酵母菌株在生產酪醇和/或紅景天苷中的應用。

8.基于權利要求1～6任意一項所述重組釀酒酵母菌株生產酪醇和/或紅景天苷的方法，包括以下步驟：

1)將所述的重組釀酒酵母菌株接種至培養基中，在30～32℃下培養10～16h，得到重組釀酒酵母種子液；

2)將步驟1)中得到的重組釀酒酵母種子液接種至新的培養基中，在30～32℃下進行發酵培養72～216h，得到酪醇和/或紅景天苷。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述步驟1)和步驟2)中培養基為篩選培養基；所述篩選培養基是以尿嘧啶及亮氨酸營養缺陷作為篩選標記的SC液體培養基；所述步驟1)和步驟2)中接種量為1％～2％；所述步驟2)中發酵培養的時間為96～200h。