[發明專利]用于檢測耶式肺孢子菌的LAMP引物組合及其應用

有效

• 申請號: 201711473083.6
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN109988856B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 張巖;王顥婷;高占成;邢婉麗;蔡美靜;程京
• 申請（專利權）人: 博奧生物集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發明公開了一種用于檢測耶式肺孢子菌的LAMP引物組合及其應用。本發明提供的引物組合，由序列1至序列6所示的6條引物組成。本發明提供的引物組合可應用于檢測待測樣本中是否含有耶式肺孢子菌。本發明提供的引物組合鑒定用于檢測耶式肺孢子菌，具有高特異性和高靈敏度，可以實現簡便、快速、準確檢測。本發明具有重大的推廣價值。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種用于檢測耶式肺孢子菌的LAMP引物組合及其應用。

背景技術

侵襲性真菌病(invasive fungal disease，IFD)又稱侵襲性真菌感染(invasivefungal infection，IFI)、深部真菌感染(deep fungal infection,DFI)，是指真菌侵入人體組織、血液，在其中生長和繁殖，引起炎癥反應，并導致組織損害、器官功能障礙的病理生理過程。近二三十年來，隨著實體器官和造血干細胞移植、腫瘤化療、免疫抑制劑等新技術在臨床中的廣泛應用，使侵襲性真菌病的發病率和病死率逐年升高，已日益成為導致住院患者死亡的主要原因之一。由于感染侵襲性真菌病多發于入住ICU，高齡，糖尿病，惡性血液系統疾病，念珠菌定植，侵襲性操作，應用抗菌藥物、糖皮質激素、免疫抑制劑等人群中，其機體免疫力低下，重癥死亡率高，因此對侵襲性真菌感染的早期檢測及確定感染菌種有極為重要的意義。

肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia，PCP)是由耶式肺孢子菌(Pneumocystisjirovecii，原名卡式肺孢子菌)引起的呼吸系統真菌感染。耶式肺孢子菌通常寄生在肺泡中，在免疫缺陷者、虛弱的早產兒或營養不良等免疫功能低下者中可能患病，是艾滋病患者最重要的機會性感染，也是艾滋病患者重要的致死原因。

現有的侵襲性真菌感染檢測方法主要包括常規檢查法和特殊檢查法兩種。其中常規檢查法主要包括：1)真菌顯微鏡檢，即直接涂片染色鏡檢；2)真菌培養鑒定；3)組織病理學檢查。特殊檢查法主要包括：1)血清學檢查；2)分子生物學檢查。其中常規檢查法仍被視為確診侵襲性真菌感染的基石，但其存在敏感度較低，操作繁復，陰性結果不能排除診斷，檢測周期較長(通常需要幾天到幾周的時間)等問題，而導致延誤病情及用藥，增加死亡率等；血清學檢測難以排除真菌某些屬的種間抗原抗體交叉反應從而導致誤判。相較前兩種方法，分子生物學技術具有高特異性和高準確性的優點，并可從基因水平闡明真菌種群之間和中內的分類學關系，因而在近年來越來越得到廣泛認可和應用。目前建立的相關分子學診斷方法有普通PCR方法、脈沖場凝膠電泳分型(PFGE)、多位點序列分型(MLST)、限制性片段長度多態性分析(RFLP)、實時熒光定量PCR技術(RTFQ-PCR)等，其共有的問題是對實驗操作要求較高，檢測時間較長(2.5h-3h左右)。因此，建立快速準確的分子診斷方法，為臨床提供早期診療依據是解決現狀的關鍵。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測耶式肺孢子菌的LAMP引物組合及其應用。

本發明首先提供引物組合，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB組成；

所述引物F3為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物B3為如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物FIP為如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；