[發(fā)明專利]檢測血液中奧氮平藥物含量的液相色譜分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711472500.5
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108267522A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏斌;賈永娟;倪君君
• 申請（專利權(quán)）人: 北京和合醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京雙收知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11241
• 代理人: 李云鵬

1.一種檢測血液中奧氮平藥物含量的液相色譜分析方法，其特征在于：它包括以下步驟：

(一)標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定

首先將至少三種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液10μL和190μL空白血清或血漿分別置于1.5ml離心管中混合制成至少三種標(biāo)準(zhǔn)溶液，上述標(biāo)準(zhǔn)溶液分別在轉(zhuǎn)速為800-1200rpm下渦旋混勻1-2min后，加入含有5-20％體積乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取劑的1000μL，并在轉(zhuǎn)速為1200-2000rpm下渦旋混勻4-6min后，再加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的轉(zhuǎn)速下渦旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的轉(zhuǎn)速下高速離心8-12min，得到清液，分別取上述清液720ul置于另一個1.5ml離心管中，在常溫下用N₂緩慢吹干；向上述吹干的離心管中加入由6∶4的甲醇和水組成的復(fù)溶液100μL，然后在1200-2000rpm轉(zhuǎn)速下渦旋混勻1-2min后，再在10000-15000rpm的轉(zhuǎn)速下高速離心4-6min，得到上清液，分別取上述上清液90uL，用液相色譜分析儀和紫外檢測器對上述上清液進(jìn)行檢測，得出上述至少三種標(biāo)準(zhǔn)溶液的奧氮平色譜圖，以上述至少三個標(biāo)準(zhǔn)溶液的奧氮平峰面積作為標(biāo)準(zhǔn)曲線圖的縱坐標(biāo)y，以上述標(biāo)準(zhǔn)工作液中含有奧氮平的濃度作為標(biāo)準(zhǔn)曲線圖的橫坐標(biāo)x，將以上檢測所得至少三組數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，擬合得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝a*x+b，并且得出權(quán)重系數(shù)a和b；所述標(biāo)準(zhǔn)工作液為含有奧氮平的溶液；

(a)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：

精確稱取奧氮平標(biāo)準(zhǔn)品5mg置于10ml容量瓶，用含水量為0％-25％的甲醇溶液進(jìn)行溶解，并定容于10ml，得到標(biāo)準(zhǔn)儲備液A，將標(biāo)準(zhǔn)儲備液A用含水量為20％-50％的甲醇溶液的稀釋液進(jìn)行稀釋，分別在含有10-5000μg/mL奧氮平的范圍內(nèi)配置出各標(biāo)準(zhǔn)工作液，并在-80℃條件下保存；

(二)檢測血液的離心

取待檢測血液至少5ml，在離心速度為3500rpm下離心10min，取上清液得血清或血漿，上述血清或血漿置于-20℃冷凍下保存至分析前備用；

(三)待測樣品處理

(b)用移液槍移取200μL步驟(二)中所述血清或血漿于1.5ml離心管中，然后用移液槍移取含有5-20％體積乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取劑1ml加入到上述離心管中，并在1200-2000rpm的轉(zhuǎn)速下渦旋混合4-6min，然后在上述離心管中加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的轉(zhuǎn)速下渦旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的轉(zhuǎn)速下高速離心8-10min，得到清液；

(c)取步驟(b)清液720μL放入另一支1.5ml離心管中，在常溫下用N₂緩慢吹干；

(d)向步驟(c)的上述吹干的離心管中加入由6∶4的甲醇和水組成的復(fù)溶液100μL，然后在1200-2000rpm轉(zhuǎn)速下渦旋混勻1-2min后，再在10000-15000rpm的轉(zhuǎn)速下高速離心4-6min，得到上清液即為待測樣品；

(四)待測樣品的檢測

使用液相色譜分析儀和紫外檢測器對上述步驟(d)待測的樣品進(jìn)行檢測，得出上述待測樣品的奧氮平色譜圖，將上述色譜圖中的奧氮平峰面積y代入上述步驟(一)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，通過計算得到待檢測樣品中目標(biāo)物濃度x，即為待檢測血液中的奧氮平藥物濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測血液中奧氮平藥物含量的液相色譜分析方法，其特征在于：在步驟(一)中使用七種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，七種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液分別為含有80、160、320、640、1280、1920、2880μg/mL濃度的奧氮平溶液。

3.如權(quán)利要求2所述的檢測血液中奧氮平藥物含量的液相色譜分析方法，其特征在于：所述萃取劑是由9∶1的甲基叔丁基醚和乙酸乙酯組成萃取劑。

4.如權(quán)利要求3所述的檢測血液中奧氮平藥物含量的液相色譜分析方法，其特征在于：在步驟(a)中用由4∶6的水和甲醇組成的稀釋液進(jìn)行稀釋。

5.如權(quán)利要求4所述的檢測血液中奧氮平藥物含量的液相色譜分析方法，其特征在于：所述高效液相色譜儀所使用的在線過濾器為SSI COL PRE-FILTER WATER 1/160.5M。