[發明專利]膠質瘤診斷標志物circ10:72715111|72715902及應用

有效

• 申請號: 201711465745.5
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107937543B
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 劉濤;武明花;李沛瑤;劉洋;劉長紅;付海娟;馮劍波
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明屬于生物技術領域，公開了膠質瘤診斷標志物circ10:72715111|72715902及應用。在本發明中，首次發現膠質瘤患者血清外泌體中circ10:72715111|72715902的表達水平相比于對照組明顯升高(p＝0.0322)，ROC分析則顯示其對膠質瘤具有較高診斷價值(AUC＝0.882，P0.005，靈敏度和特異性分別為79.2％和100％)。因此通過檢測膠質瘤患者血清外泌體中circ10:72715111|72715902的表達水平，可對膠質瘤患者做出早期、快速的無創性診斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤診斷的血清circRNA標志物circ10:72715111|72715902、以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤診斷制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

膠質瘤又叫膠質細胞瘤或神經膠質瘤,其發病率高,惡性程度高，治療復雜且預后差,是對人類健康造成巨大威脅的一類疾病，其中成年人多形性膠質母細胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)中位發病年齡約為65歲，中位生存期僅為14個多月，5年病死率在全身腫瘤中僅次于胰腺癌和肺癌,位列第3位。在神經系統腫瘤中，原發性中樞神經系統(central nervous system,CNS)腫瘤的發生率約為5:100 000～10:100 000，其中膠質瘤就占40％，而惡性膠質瘤約占膠質瘤的50％。惡性膠質瘤給患者帶了巨大痛苦，給社會造成巨大經濟負擔,一直以來都是腫瘤研究的熱點。因此，尋找膠質瘤診斷標志物對患者進行診斷分析，盡早確診病情，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是神經科學領域亟待解決的研究任務。

環狀RNA(Circular RNA,circRNA)是一類具有閉合環狀結構的內源性非編碼RNA(noncoding RNA,ncRNA)，主要由前體RNA(pre-mRNA)通過可變剪切加工產生，circRNA廣泛存在于所有真核生物中，并且非常穩定。目前，circRNA的研究已經成為了RNA研究領域的新熱點，研究發現circRNA在轉錄本中占有相當大的比例，有的表達豐度甚至顯著高于其他轉錄本。同時，circRNA對基因的表達有重要調控作用，在生物的發育進程中發揮了重要的生物學功能，如充當miRNA海綿、作為內源性RNA以及生物標記物，在疾病的診斷與治療中也發揮重要作用。研究發現circRNA在一些疾病的發生中扮演了重要角色，包括動脈硬化、神經系統紊亂、糖尿病和癌癥的發生。近年來逐漸發現外泌體中也含有大量的CircRNA，可能發揮重要作用。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)，現今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。外泌體是細胞與細胞間通訊的重要的分子，參與諸多生理與病理過程。外泌體所攜帶的RNA統稱為外泌體來源RNA，其中circRNA具有豐富性、穩定性、高保守性和時空特異性等特點，有望作為液體活檢分子標志物，在精準醫學發展上有著光明的前景。

發明內容

本發明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物。

主要內容包括：一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物circ10:72715111|72715902，其序列如SEQ NO:1所示。該circRNA位于人類的第10號染色體上，全長792bp。

本發明的第二個目的是，提供檢測所述的circRNA標志物在血清外泌體中表達量的試劑在制備膠質瘤診斷制劑中的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種膠質瘤診斷試劑盒，其能夠測定血清外泌體中的circ10:72715111|72715902的含量。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，含有檢測circ10:72715111|72715902含量的PCR引物。優選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，除circ10:72715111|72715902的引物外，還含有從血清中提取外泌體、由外泌體中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。