[發明專利]膠質瘤預后標志物circ1:1804419|1806538及應用

有效

• 申請號: 201711465740.2
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107937541B
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 武明花;劉強;劉長紅;李沛瑤;馮紫陽;劉洋;趙春花
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明公開了一種膠質瘤預后標志物circ1:1804419|1806538及應用。即檢測膠質瘤來源的circRNAcirc1:1804419|1806538的試劑用于制備膠質瘤患者的預后制劑。通過研究證實高表達circ1:1804419|1806538的患者，其生存預后較差。通過檢測膠質瘤患者膠質瘤組織中circ1:1804419|1806538的表達水平，從而對膠質瘤患者做出預后判斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤預后的circRNA標志物、以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤預后制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

膠質瘤是最常見的中樞神經系統的惡性腫瘤,具有較強的侵襲性和進展性。目前臨床治療上采用的主要方法有手術切除、放療及化療的綜合療法,但由于膠質瘤的生長特性,與周圍腦組織界限不清,手術難以切除完全,而放療、化療由于膠質瘤對其耐受性等治療的局限性,療效有限,患者中位生存期較短,尤其對于高級別膠質瘤,治療后復發率較高,預后差,中位生存期不足一年,病死率高,嚴重威脅患者生命影響人類健康。因此，尋找膠質瘤預后標志物對患者進行預后分析，以提高膠質瘤患者的術后生活質量，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是神經科學領域亟待解決研究任務。

環狀RNA(circRNA)是一類不同于線性RNA的內源非編碼RNA,它是通過反向剪接形成的閉合環狀RNA分子,不具有5’端帽子和3’端poly A尾巴結構,能夠穩定存在于各種類型真核細胞中。隨著生物信息學的快速發展和高通量測序技術的不斷革新,目前已經在真核細胞中發現了大量內源性circRNA,其中一些circRNA表達豐度高并呈現出時空表達特異性和物種間保守性,表明circRNA可能在調節基因表達方面具有重要功能，有作為諸多疾病分子標志物的潛力。

發明內容

本發明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤患者預后的膠質瘤組織來源的circRNA標志物circ1:1804419|1806538，其序列如SEQ NO:1所示。

本發明的第二個目的是，提供檢測所述的circRNA標志物在膠質瘤組織中表達量的試劑在制備膠質瘤預后制劑中的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種膠質瘤預后試劑盒，能夠測定膠質瘤組織中的circ1:1804419|1806538的含量。

所述的膠質瘤預后試劑盒，含有檢測circ1:1804419|1806538含量的PCR引物。優選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤預后試劑盒，除circ1:1804419|1806538的引物外，還含有從膠質瘤組織中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。包括：

(1)從膠質瘤組織中抽提總RNA所用試劑，包括RNA穩定溶液、Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、無酶水；

(2)以總RNA為模板將circ1:1804419|1806538逆轉錄為cDNA所用試劑，包括逆轉錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉錄酶以及circ1:1804419|1806538所用隨機引物；

(3)將cDNA實時定量PCR所用試劑，包括circRNA circ1:1804419|1806538實時熒光定量PCR特異性引物、GAPDH內參特異性PCR引物、實時熒光定量SYBR染料、無酶水。申請人通過熒光定量PCR對16例膠質瘤組織與6例正常腦組織進行分析發現，circ1:1804419|1806538在兩者中的表達差異明顯(見圖1，P＝0.0424)，后對其中15例膠質瘤患者進行生存曲線分析，發現膠質瘤組織來源的circ1:1804419|1806538與患者的生存率相關(見圖2，P＝0.04)，表達水平含量越高，生存預后較差。此法為膠質瘤的預后分析提供了強有力的技術支持，有助于提高膠質瘤患者的術后生活時間。

附圖說明