[發明專利]細胞保存方法和細胞運輸方法

在審

• 申請號: 201711465084.6
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108029678A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 熊華強;孫靜;秦連榮;熊惠芳
• 申請（專利權）人: 重慶斯德姆生物技術有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 劉立春

本發明涉及生物技術領域，提供了一種保存活細胞的細胞保存方法和細胞運輸方法，具體地，涉及一種在維持細胞功能的狀態下結合細胞保存液保存活細胞的細胞保存方法和細胞運輸方法。本發明所述的細胞保存方法的方式是使用具有多個微空間的細胞培養器并結合細胞保存液來保護活細胞的細胞保存方法，使活細胞粘附在上述多個微空間的表面來進行培養，在上述培養后，將含有8％～20％HES(羥乙基淀粉)、50mg/L～150mg/L鏈霉素、10％～30％DMSO(二甲基亞砜)細胞保存液的培養基向上述細胞培養器注入，以覆蓋上述多個微空間，將上述細胞培養容器密封，以使培養基不漏出，進行保存，能夠以維持功能的狀態保存活細胞。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種保存活細胞的細胞保存方法和細胞運輸方法。

背景技術

血液、稀少細胞以及生物體組織等的保存中，通常采用傳統的慢速冷卻低溫保存法，即“兩步法”進行保存。特別是骨髓細胞、造血干細胞、間充質干細胞等稀少細胞，這些細胞在臨床治療中具有相當有益的效果，需要對其進行長期保存的技術。在這種低溫度下的保存中，通常將上述血液、稀少細胞以及生物體組織等裝入收裝這些物質的容器中，然后密封在液氮內保存。但受冷卻速率的影響，會對保存的細胞或組織造成損傷。若降溫速率過快，則形成胞內冰，這些胞內冰在復溫過程中會發生再結晶使細胞受損；若降溫速率過慢，則細胞收縮過劇，并且細胞處在高濃度溶液中也會引起損傷。

在組織細胞的培養中，由于使用的用于細胞培養試驗的細胞培養株，要求其表現與在生物體內的試驗，即所謂體內(in vivo)試驗同樣的藥物感受性、毒性反應，需要在細胞培養容器的表面能夠構筑有規則性地排列的細胞間網絡。另外，由于在細胞培養試驗中使用的細胞培養株極為昂貴，因此期望提高細胞的生存率和增殖速度。

為了解決上述兩個問題，本發明提供了一種在維持細胞功能的狀態下結合細胞保存液保存活細胞的細胞保存方法和細胞運輸方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種在維持細胞功能的狀態下結合細胞保存液保存活細胞的細胞保存方法和細胞運輸方法，可以解決現有細胞保存液受冷卻速率影響的問題，同時也能解決在細胞培養試驗中期望提高細胞生存率和增殖速度的問題。

本發明的一個方面提供了一種使用具有多個微空間的細胞培養器并結合細胞保存液來保護活細胞的細胞保存方法，使活細胞粘附在上述多個微空間的表面來進行培養，在上述培養后，將含有8％～20％HES(羥乙基淀粉)、50mg/L～150mg/L鏈霉素、10％～30％DMSO(二甲基亞砜)細胞保存液的培養基向上述細胞培養器注入，以覆蓋上述多個微空間，將上述細胞培養容器密封，以使培養基不漏出，進行保存。在微空間的表面粘附活細胞，使用適于培養的微空間進行培養，在各微容器內形成三維結構體，利用微容器隔離三維結構體后，并結合細胞保存液進行密封并保存，更能夠以維持功能的狀態保存活細胞。

在另一優選例中，所述細胞培養容器置于4℃～37℃溫度條件下來保存上述活細胞。優選地，所述培養溫度為10℃～20℃。

在另一優選例中，所述細胞保存液中HES的濃度為8％～10％；在具體的實施方式中，所述培養基中的HES的濃度為10％。

在另一優選例中，所述細胞保存液中鏈霉素的濃度為50mg/L～100mg/L；在具體的實施方式中，所述鏈霉素的濃度為80mg/L。

在另一優選例中，所述細胞保存液中DMSO的濃度為10％～20％；在具體的實施方式中，所述DMSO的濃度為10％。

在另一優選例中，所述多個微空間優選底部面積為0.02～0.15mm2、深度為20～100μm。

在另一優選例中，所述活細胞選自下述細胞的一種或者多種：肝細胞、胰β細胞、心肌細胞、神經細胞、皮膚上皮細胞、軟骨細胞、骨細胞、組織干細胞、ES細胞和iPS細胞；優選地，選自組織干細胞、軟骨細胞、和骨細胞中的一種或者多種。