[發明專利]含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉質性狀的檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201711463968.8
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108048577A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 劉武軍;馬海玉;方超;方麗君;趙國藝;劉玲玲;于茜;褚洪忠
• 申請（專利權）人: 新疆農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉質性狀的檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括：

（1）特異性引物：

SEC62特異性引物：

上游引物F：5'-GATAGCAGCCACCCTCTTCC-3'；

下游引物R：5'-ACGAGCAACAGCAAGGAGAA-3'；

（2）cDNA模板；

（3）熒光定量PCR反應液和無RNA酶水。

2.如權利要求1所述含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉質性狀的檢測試劑盒，其特征在于，所述的熒光定量PCR反應液為2.5×Real Master Mix。

3.如權利要求1所述含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉質性狀的檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括2.5×Real Master Mix10μl，上下游引物各0.4μl，cDNA模板1.5μl。

4.一種如權利要求1所述含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉質性狀的檢測試劑盒的應用，其特征在于，包括以下步驟：

（1）cDNA提取：采取阿勒泰羊血樣5ml，提取RNA，在-80℃保存；反轉錄為cDNA，用內參基因ACTB進行PCR擴增；

（2）SEC62基因PCR擴增：特異性擴增SEC62基因的兩個片段；反應條件為：94℃預變性5min，94℃變性30s、退火溫度30s、72℃延伸1min，循環31次，72℃延伸5min，4℃保存；

（3）熒光定量PCR檢測：在96孔板中分別加入一下熒光定量PCR反應體系：2.5×RealMasterMix(SYBR Green) 10μl，上下游引物各0.4μl，cDNA模板1.5μl，加水至總體積20μl；循環條件為95℃預變性30s；95℃變性5s；60℃退火30s共42個循環；最后在95℃10s、65℃5s、94℃5s，作熔解曲線；

（4）基因表達量與蛋白質含量及氨基酸含量的關聯分析：對SEC62基因在阿勒泰羊股四頭肌中的表達量與必須氨基酸含量進行顯著性檢驗。