[發明專利]中空介孔碳固定化漆酶及其制備方法

有效

• 申請號: 201711463624.7
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107893066B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 劉智峰;邵彬彬;曾光明;李志剛;劉洋;劉玉杰;蔣藝林;唐旺旺
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙) 43008
• 代理人: 張鮮

1.一種中空介孔碳固定化漆酶的制備方法，包括以下步驟：

將中空介孔碳加入到含有漆酶和鼠李糖脂的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液中，所述含有漆酶的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液的pH為4.5～5.5，鼠李糖脂濃度為10～20mg/L，漆酶濃度為1.0～1.8mg/mL，所述中空介孔碳與含有漆酶的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液的用量比為100mg∶100～200mL，在25～30℃、150～200rpm下恒溫振蕩固定化2～3h，得到中空介孔碳固定化漆酶；所述中空介孔碳固定化漆酶以中空介孔碳為載體，漆酶直接物理吸附在中空介孔碳的中空內腔；所述中空介孔碳的孔徑主要分布在2～40nm，平均孔徑達到11.8nm。

2.一種中空介孔碳固定化漆酶的制備方法，包括以下步驟：

（1）將質量分數為25%的氨水和中空介孔碳混合，所述中空介孔碳與氨水的用量比為100mg∶50～70mL，在200℃下水熱反應12h，得到氨基化中空介孔碳；

（2）將氨基化中空介孔碳加入到質量濃度為5～10%的戊二醛溶液中，所述氨基化中空介孔碳與戊二醛溶液的用量比為100mg∶5～10mL，在室溫下攪拌20～24h，得到連接戊二醛的氨基化中空介孔碳；

（3）將連接戊二醛的氨基化中空介孔碳加入到含有漆酶和鼠李糖脂的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液中，所述含有漆酶的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液的pH為4.5～5.5，鼠李糖脂濃度為10～20mg/L，漆酶濃度為1.0～1.8mg/mL，所述連接戊二醛的氨基化中空介孔碳與含有漆酶的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液的用量比為100mg∶100～200mL，在25～30℃、150～200rpm下恒溫振蕩固定化2～3h，得到中空介孔碳固定化漆酶；

所述中空介孔碳固定化漆酶以中空介孔碳為載體，漆酶利用戊二醛，通過共價交聯固定在中空介孔碳的中空內腔；所述中空介孔碳的孔徑主要分布在2～30nm，平均孔徑達到13.5nm。

3.根據權利要求1或2所述的中空介孔碳固定化漆酶的制備方法，其特征在于，所述中空介孔碳由以下方法制得：

以正硅酸丙酯、無水乙醇、氨水、間苯二酚和甲醛為原料，自組裝形成介孔碳球前體；然后碳化，脫硅，離心，得到中空介孔碳。

4.根據權利要求3所述的中空介孔碳固定化漆酶的制備方法，其特征在于，所述介孔碳球前體的具體制備過程為：將正硅酸丙酯加入到無水乙醇和超純水的混合溶液中，再加入氨水，室溫下攪拌15～20 min；再加入間苯二酚和甲醛，室溫下持續攪拌20～24h，離心，漂洗，干燥，粉碎，得到介孔碳球前體。

5.根據權利要求4所述的中空介孔碳固定化漆酶的制備方法，其特征在于，所述氨水的質量分數為25%，所述正硅酸丙酯、無水乙醇、氨水、間苯二酚和甲醛的用量比為34.6mL∶600～700mL∶30mL∶4.0g∶5.6mL。

6.根據權利要求5所述的中空介孔碳固定化漆酶的制備方法，其特征在于，所述碳化溫度為700℃，碳化時間為4～5h。

7.根據權利要求6 所述的中空介孔碳固定化漆酶的制備方法，其特征在于，所述脫硅介質為質量分數為10～20%的氫氟酸溶液，脫硅時間為20～24h。