[發(fā)明專利]自表達(dá)CD47抗體的間皮素特異性CAR-T細(xì)胞及其用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711460026.4
• 申請(qǐng)日: 2017-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109971721A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢其軍;金華君;江芏清;何周;李赫;李林芳;王超;崔連振
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海細(xì)胞治療研究院;上海細(xì)胞治療集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C07K16/28;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/13;C12N15/63;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發(fā)明涉及自表達(dá)CD47抗體的間皮素特異性CAR?T細(xì)胞及其用途。本發(fā)明的所述T細(xì)胞：(1)含有識(shí)別間皮素抗原的嵌合抗原受體的編碼序列和CD47抗體的編碼序列；和/或(2)表達(dá)識(shí)別間皮素抗原的嵌合抗原受體和CD47抗體。本發(fā)明的T細(xì)胞在特異性靶向間皮素高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞同時(shí)，可以分泌CD47抗體，消除腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，恢復(fù)巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬作用，從而達(dá)到更好的抗腫瘤效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程學(xué)和免疫學(xué)，涉及自表達(dá)CD47抗體的間皮素特異性CAR-T細(xì)胞及其用途。

背景技術(shù)

癌癥現(xiàn)在已成為人類健康的頭號(hào)殺手，快速的生活節(jié)奏、巨大的工作壓力、不健康的飲食習(xí)慣、糟糕的環(huán)境都是癌癥發(fā)生的幫兇，使得癌癥的高發(fā)率和年輕化趨勢(shì)也越來(lái)越明顯。目前常用的治療手段效果十分有限，仍需探索一個(gè)更加有效的治療方法，來(lái)提高癌癥患者的生存率和生存質(zhì)量。

針對(duì)惡性腫瘤的免疫治療近年來(lái)發(fā)展迅速，取得了令人矚目的臨床療效。自2011年，Nature及臨床腫瘤最頂級(jí)雜志JCO分別發(fā)表相同題目“腫瘤免疫治療的時(shí)代已經(jīng)來(lái)臨”的評(píng)論文章(Nature.2011；480(7378):480；J Clin Oncol.2011；29(36):4828)，腫瘤免疫細(xì)胞治療迎來(lái)新一輪的研究熱潮。

嵌合抗原受體T細(xì)胞療法作為腫瘤免疫治療的重要分支之一，在惡性血液腫瘤中已經(jīng)取得了非常好的療效，對(duì)復(fù)發(fā)難治性B細(xì)胞白血病的完全緩解率超過(guò)90％。2017年8月，美國(guó)FDA批準(zhǔn)了諾華的tisagenlecleucel嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T細(xì)胞)治療用于治療兒童和年輕成年患者急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)，成為第一個(gè)批準(zhǔn)上市的CAR-T藥物。緊接著同年10月，美國(guó)FDA又宣布批準(zhǔn)了Kite Pharma的CAR-T療法Yescarta上市，治療罹患特定類型的大B細(xì)胞淋巴瘤成人患者。CAR-T藥物的陸續(xù)獲批使得CAR-T治療邁上了一個(gè)新的臺(tái)階。

嵌合抗原受體是一種人工合成受體，它通常包含胞外抗原結(jié)合域、跨膜鉸鏈區(qū)和胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)。通過(guò)將識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigen,TAA)的抗體單鏈可變區(qū)(single-chain fragment variable，scFv)和胞內(nèi)信號(hào)域“免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs，ITAM)”在體外進(jìn)行基因重組。再通過(guò)病毒或其它載體系統(tǒng)將其導(dǎo)入T細(xì)胞中，這樣經(jīng)過(guò)基因改造的T細(xì)胞稱之為CAR-T細(xì)胞。CAR-T細(xì)胞在體外經(jīng)大規(guī)模擴(kuò)增后，回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，能夠以非MHC限制性的模式表現(xiàn)強(qiáng)效的抗癌作用。

但是，CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體瘤的療效目前仍不足。主要原因包括：1、實(shí)體瘤異質(zhì)性高，缺乏適合CAR-T治療的細(xì)胞表面靶點(diǎn)；2、實(shí)體瘤具有強(qiáng)烈抑制免疫的微環(huán)境。

間皮素是一種通過(guò)磷脂酰肌醇區(qū)(GPI)錨定在細(xì)胞質(zhì)膜上的糖蛋白，高表達(dá)于多種腫瘤組織中，少量表達(dá)于正常胸膜、心包和腹膜的間皮細(xì)胞中。間皮素基因編碼一種69kDa的前體蛋白，經(jīng)加工形成一個(gè)40kDa的膜結(jié)合蛋白和一個(gè)31kDa稱之為巨核細(xì)胞促進(jìn)因子(MPF)的脫落片斷并釋放出細(xì)胞外，我們通常所說(shuō)的間皮素指的是錨定在膜上的片段，根據(jù)其蛋白結(jié)構(gòu)可以分為Region I、II、III三個(gè)區(qū)域。它一方面可以通過(guò)其GPI結(jié)構(gòu)域激活NFκB、MAPK和PI3K細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抵抗細(xì)胞凋亡；另一方面與其受體CA125/MUC16相互作用導(dǎo)致異常的細(xì)胞粘附，促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。由于間皮素在正常組織中的分布有限而在多種惡性腫瘤(間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、膽管癌等)中過(guò)表達(dá)，因此是一個(gè)很有潛力的腫瘤特異性治療靶點(diǎn)。