[發明專利]一種極端環境來源的堿性蛋白酶異源表達工程菌株及其應用有效
| 申請號： | 201711459372.0 | 申請日： | 2017-12-28 |
| 公開（公告）號： | CN108085327B | 公開（公告）日： | 2021-02-19 |
| 發明（設計）人： | 李愛英;呂金;徐京華;張友明;李瑞娟;李彩云 | 申請（專利權）人： | 山東大學 |
| 主分類號： | C12N15/57 | 分類號： | C12N15/57;C12N9/52;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 250061 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 極端 環境 來源 堿性 蛋白酶 表達 工程 菌株 及其 應用 | ||
1.一種極端環境來源的堿性蛋白酶編碼基因，其特征在于：所述堿性蛋白酶基因命名為ap1-HSL10，該基因序列來源于氧化微桿菌(
2.一種極端環境來源的堿性蛋白酶，其特征在于：所述堿性蛋白酶命名為AP1，由權利要求1所述極端環境來源的堿性蛋白酶編碼基因編碼；堿性蛋白酶AP1氨基酸序列來源于氧化微桿菌HSL10，編碼的蛋白含有絲氨酸蛋白酶催化活性結構域和催化活性三聯體殘基。
3.一種異源表達極端環境來源的堿性蛋白酶AP1的工程菌，其特征在于：所述工程菌命名為E.coli BL21/pHSL-AP1，是利用E.coli BL21為出發菌株，通過電轉化在其細胞內導入由pET28a(+)質粒攜帶的ap1-HSL10基因獲得；攜帶ap1-HSL10基因的pET28a(+)質粒的構建方法為，以氧化微桿菌 HSL10基因組為模板，通過引物F-AP1:cgccatatggcgCTACTCCGGCTTCGCCGTTT和R-AP1:cccaagcttgggATGGGTCGAACACCCCTCCG，擴增得到含有權利要求1所述的極端環境來源的堿性蛋白酶編碼基因的目的片段，目的基因兩端帶有NdeI和HindIII的酶切位點，雙酶切構建攜帶ap1-HSL10基因的pET28a(+)質粒。
4.權利要求3所述異源表達極端環境來源的堿性蛋白酶AP1的工程菌在表達堿性蛋白酶AP1中的應用。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于：所述異源表達極端環境來源的堿性蛋白酶AP1的工程菌的培養條件是：在SYN培養基的基礎上添加1％葡萄糖進行誘導表達，誘導使用的IPTG濃度為0.4mmol/L。
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