[發(fā)明專利]共表達CD40抗體與間皮素特異性嵌合抗原受體的T細胞及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711459160.2
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN109971717B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢其軍;金華君;唐熙;江芏青;何周;張志偉;李林芳;王超
• 申請（專利權(quán)）人: 上海細胞治療研究院;上海細胞治療集團有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C07K16/28;C07K19/00;C07K16/30;C12N15/62;C12N15/13;C12N15/63;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發(fā)明涉及共表達CD40抗體與間皮素特異性嵌合抗原受體的T細胞及其用途。本發(fā)明的T細胞含有識別間皮素的嵌合抗原受體的編碼序列和CD40激活性抗體的編碼序列；和/或表達識別間皮素的嵌合抗原受體和CD40激活性抗體。本發(fā)明的T細胞中外源表達的CAR基因可以準確的靶向間皮素抗原，增強T細胞的增殖能力及細胞因子的分泌，表達的CD40抗體能夠幫助CAR?T細胞突破腫瘤微環(huán)境的抑制，提升CAR?T細胞的存活率與效力，從而增強CAR?T細胞對腫瘤細胞的殺傷，并通過增強免疫反應(yīng)，發(fā)揮抗腫瘤作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程學和免疫學，涉及共表達CD40抗體與間皮素特異性嵌合抗原受體的T細胞及其用途。

背景技術(shù)

腫瘤免疫療法是當前腫瘤治療領(lǐng)域中最具前景的研究方向之一，《science》雜志將腫瘤免疫療法評為2013年十大科學突破第一位。腫瘤免疫療法類目繁多，迄今為止，最熱門、療效最佳、最具潛力攻克腫瘤頑疾的免疫治療法為嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)。諾華的Kymriah和Kite的Yescarta兩款CAR-T產(chǎn)品已經(jīng)獲批上市。

嵌合型抗原受體(CAR)是一種人工合成受體，它通常包含胞外抗原結(jié)合域、跨膜鉸鏈區(qū)和胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)。通過將識別腫瘤相關(guān)抗原(tumor?associated?antigen,TAA)的抗體單鏈可變區(qū)(scFv)和胞內(nèi)信號域“免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptortyrosine-based?activation?motifs，ITAM)”在體外進行基因重組，生成重組質(zhì)粒。再將這種質(zhì)粒通過基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入T細胞中，這樣經(jīng)過基因改造的T細胞稱之為CAR-T細胞。CAR-T細胞在體外經(jīng)大規(guī)模擴增后，回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，能夠以非MHC限制性的模式表現(xiàn)強效的抗癌作用。

2016年底，已記錄了220項CAR-T細胞試驗，目前的試驗中，針對血液惡性腫瘤的有133項，針對實體瘤的有78項。CAR-T細胞在血液類的癌癥治療中取得了很大的成功，例如其中最常用的抗原MESO，平均客觀應(yīng)答率超過60％。但血液腫瘤僅僅是眾多癌癥中較小的一部分，實體瘤占據(jù)腫瘤的90％，而CAR-T在血液腫瘤的療效與實體腫瘤治療效果相差甚遠。主要原因包括：1.實體瘤異質(zhì)性高，缺乏適合CAR-T治療的細胞表面靶點。2.實體瘤具有強烈抑制免疫的微環(huán)境。

間皮素是一種通過磷脂酰肌醇區(qū)(GPI)錨定在細胞質(zhì)膜上的糖蛋白，高表達于多種腫瘤組織中，少量表達于正常胸膜、心包和腹膜的間皮細胞中。間皮素基因編碼一種69kDa的前體蛋白，經(jīng)加工形成一個40kDa的膜結(jié)合蛋白和一個31kDa稱之為巨核細胞促進因子(MPF)的脫落片斷并釋放出細胞外，我們通常所說的間皮素指的是錨定在膜上的片段，根據(jù)其蛋白結(jié)構(gòu)可以分為Region?I、II、III三個區(qū)域。它一方面可以通過其GPI結(jié)構(gòu)域激活NFκB、MAPK和PI3K細胞內(nèi)信號通路，促進細胞增殖，抵抗細胞凋亡；另一方面與其受體CA125/MUC16相互作用導(dǎo)致異常的細胞粘附，促進癌細胞轉(zhuǎn)移。由于間皮素在正常組織中的分布有限而在多種惡性腫瘤(間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、膽管癌等)中過表達，因此是一個很有潛力的腫瘤特異性治療靶點。

目前，以間皮素為靶點的小分子藥物、抗毒素已經(jīng)取得了很好的效果，以此為靶點的CAR-T細胞研究也在如火如荼的展開，主要是針對胰腺癌(NCT01897415,NCT02465983)，間皮瘤(NCT01355965,NCT02414269)，肺癌和乳腺癌(NCT02414269)。