[發明專利]一種基于分子生物學的黃腿螯蜂的鑒別引物及方法

有效

• 申請號: 201711458336.2
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107904318B
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 田俊策;呂仲賢;王國榮;鄭許松;徐紅星
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發明公開了一種基于分子生物學的黃腿螯蜂的鑒別引物及方法。所述的鑒別引物包括CBYF和CBYR，其序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。該方法包括以下步驟：提取待檢測樣本的基因組DNA作為PCR的模板；對待檢測樣本基因組DNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物并進行電泳分離鑒定；于342bp處觀察到條帶，則該待測樣本為黃腿螯蜂；否則，則該待測樣本不是黃腿螯蜂。本發明可以簡單快速有效的在分子生物學水平對黃腿螯蜂進行分子鑒定。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地說，涉及一種基于分子生物學的黃腿螯蜂的鑒別引物及方法。

背景技術

黃腿螯蜂(Pseudogonatopus flavifemur)屬于膜翅目腫腿蜂總科(Bethyloidea)螯蜂科(Dryinidae)，雌雄異形的外寄生蜂。雌蟲無翅，咀嚼式口器，不僅寄生寄主致死還主動捕獲取食寄主致死，是十分具有生物防治潛力的天敵。

稻田中還有其他3種常見的螯蜂，包括黑腹螯蜂(Haplogonatopus atratus)、稻虱紅螯蜂(Haplogonatopus japonicus)和雙色螯蜂(Echthrodelphax bicolor)。這4種螯蜂是水稻重要害蟲稻飛虱(包括褐飛虱、白背飛虱和灰飛虱)的寄生性天敵，由于螯蜂兼具寄生性和捕食性，對稻飛虱的發生具有較好的抑制作用，特別是黃腿螯蜂喜好寄生和取食近年頻繁爆發為害的褐飛虱，對褐飛虱的為害具有十分良好的控制作用。但是由于螯蜂的雌雄蟲在形態上十分相似，特別是雄蟲形態上基本無法區分，且寄生飛虱后其幼蟲形成的幼蟲囊即使在顯微鏡下也能難區分。因此，目前只能通過專業的昆蟲分類專家對其進行形態學上的區分。

物種鑒定難的現狀限制了對黃腿螯蜂的進一步研究和利用，如在調查田間稻飛虱被螯蜂寄生率時就很難明確黃腿螯蜂所占的比例，或是在田間采集到螯蜂繭未能羽化或羽化出雄蜂也非常難鑒定為何種螯蜂。為了解決這一難題，需要尋找一找分子生物學區分方法進行鑒別。

發明內容

有鑒于此，本發明針對上述的問題，提供了一種基于分子生物學的黃腿螯蜂的鑒別引物及方法。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種基于分子生物學的黃腿螯蜂的鑒別引物，包括CBYF和CBYR，其序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

本發明還公開了一種基于分子生物學的黃腿螯蜂的鑒別方法，包括以下步驟：

步驟1、提取待檢測樣本的基因組DNA作為PCR的模板；

步驟2、對待檢測樣本基因組DNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物并進行電泳分離鑒定；

步驟3、于342bp處觀察到條帶，則該待測樣本為黃腿螯蜂；

否則，則該待測樣本不是黃腿螯蜂。

進一步地，所述PCR擴增體系如下：PCR體系25μL，包括ddH₂O 9.5μL、2*Taq PCRMaster Mix：12.5μL、待檢測樣本DNA模板：1.0μL、引物CBYF:1.0μL、引物CBYR：1.0μL。

進一步地，所述PCR擴增程序為：94℃下預變性5min，94℃下變性30s，62℃下退火30s，72℃下延伸1min，35個循環；循環結束后，72℃下延伸10min，最后反應終止在4℃。

與現有技術相比，本發明可以獲得包括以下技術效果：

1)本發明不需要傳統分類相關領域的專業分類知識。

2)本發明可以簡單快速有效的在分子生物學水平對黃腿螯蜂進行分子鑒定。

3)本發明成本低廉、操作簡單、鑒定準確率高。

當然，實施本發明的任一產品并不一定需要同時達到以上所述的所有技術效果。