[發(fā)明專利]一種原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法和應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN109971699A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張琳琳;張培榮;竇雯雯
• 申請（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法和應(yīng)用，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、胰島素、抗生素、表皮細(xì)胞生長因子和4?羥乙基哌嗪乙磺酸。本發(fā)明配方成分明確，可以實(shí)現(xiàn)原代小鼠小腸上皮細(xì)胞快速擴(kuò)增，該配方方法簡單，細(xì)胞生長形態(tài)好，配方成分中含有抗生素，細(xì)胞增殖速度快，活力旺盛，配方的制備工藝簡單，應(yīng)用效果良好，細(xì)胞存活率較傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)液顯著提高，且長期保存不易失效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)及醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，具體為一種原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

在生物和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，由于小鼠較其他實(shí)驗(yàn)動物喂養(yǎng)成本相對低，傳代快及其他各項(xiàng)特點(diǎn)，經(jīng)常會使用小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。由于小腸上皮細(xì)胞是位于小腸表層的細(xì)胞，具有分泌，排泄，保護(hù)和吸收等作用，是腸道最重要也是最主要的功能之一，因此經(jīng)常利用小腸上皮細(xì)胞進(jìn)行腸道功能、損傷或疾病的研究。由于小腸上皮細(xì)胞對培養(yǎng)條件要求較高，傳統(tǒng)的培養(yǎng)液不能滿足小鼠小腸上皮細(xì)胞的培養(yǎng)要求，往往造成小鼠小腸細(xì)胞成活率不高，細(xì)胞生長形態(tài)、功能不好，難以穩(wěn)定傳代。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明的目的之一在于，提供一種原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、胰島素、抗生素、表皮細(xì)胞生長因子和4-羥乙基哌嗪乙磺酸。

進(jìn)一步地，所述抗生素包括青霉素和鏈霉素。

進(jìn)一步地，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液為DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液。

進(jìn)一步地，所述DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含有胎牛血清10％，L-谷氨酰胺4mM，丙酮酸鈉1mM，胰島素10ug/ml，青霉素50U/ml，鏈霉素50μg/ml，表皮細(xì)胞生長因子20ng/ml，4-羥乙基哌嗪乙磺酸10mM。

根據(jù)本發(fā)明的另一個目的，提供上述一種原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，包括混合所述配方比例的DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、胰島素、抗生素、表皮細(xì)胞生長因子和4-羥乙基哌嗪乙磺酸。

進(jìn)一步地，所述培養(yǎng)液的制備過程中，將上述各成分物質(zhì)置于無菌容器中按比例均勻混合。

根據(jù)本發(fā)明的另一個目的，提供上述一種原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液的應(yīng)用，應(yīng)用于原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果：

本發(fā)明一種用于原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法和應(yīng)用，配方成分明確，可以實(shí)現(xiàn)原代小鼠小腸上皮細(xì)胞快速擴(kuò)增，該配方方法簡單，細(xì)胞生長形態(tài)好，配方成分中含有抗生素，細(xì)胞增殖速度快，活力旺盛，配方的制備工藝簡單，應(yīng)用效果良好，細(xì)胞存活率較傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)液顯著提高。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明具體實(shí)施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

一種原代小鼠小腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液，包括DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液，DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含有胎牛血清10％，L-谷氨酰胺4mM，丙酮酸鈉1mM，胰島素10ug/ml，青霉素50U/ml，鏈霉素50μg/ml，表皮細(xì)胞生長因子20ng/ml，4-羥乙基哌嗪乙磺酸10mM。