[發明專利]基于光切割基序的蛋白純化方法

有效

• 申請號: 201711456927.6
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN109971776B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 王靖;王磊;安泰;陳博;朱鏡羲;楊凱;牛興和;郝小明
• 申請（專利權）人: 中糧集團有限公司;中糧營養健康研究院有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/62;C07K14/47;C07K1/14
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 朱學珺;張淑珍

1.一種蛋白純化方法，所述方法包含如下步驟：

a)在宿主細胞中表達融合蛋白，所述融合蛋白包含目的肽、用于純化的功能片段以及連接所述目的肽和所述功能片段的光切割基序；

b)使得所述融合蛋白與所述宿主細胞分離；

c)利用385nm波長的光對所述融合蛋白照射30-100min；以及

d)將所述目的肽從所述片段混合物中分離，從而獲得純化的所述目的肽，

其中，所述融合蛋白由SEQ ID NO：10所示的DNA序列編碼。

2.如權利要求1所述的方法，其中，步驟a)中，所述宿主細胞為原核細胞或真核細胞。

3.如權利要求2所述的方法，其中，所述宿主細胞為大腸桿菌、釀酒酵母、巴斯德畢赤酵母、枯草芽孢桿菌、里氏木霉、黑曲霉、昆蟲或哺乳動物細胞。

4.如權利要求3所述的方法，其中，所述宿主細胞為大腸桿菌細胞。

5.如權利要求4所述的方法，其中，所述大腸桿菌細胞選自Top10和DH10B菌株。

6.如權利要求3所述的方法，其中，所述宿主細胞為昆蟲細胞。

7.如權利要求6所述的方法，其中，所述昆蟲細胞選自細胞株Sf9、Sf21和High Five細胞。

8.如權利要求3所述的方法，其中，所述宿主細胞為哺乳動物細胞。

9.如權利要求8所述的方法，其中，所述哺乳動物細胞選自細胞株CHO和HEK293細胞。

10.如權利要求1所述的方法，其中，步驟b)中，通過對所述宿主細胞進行裂解或破碎，離心去除所述宿主細胞的裂解液或勻漿液中的可溶部分，獲得包含所述融合蛋白的沉淀部分，從而使得所述融合蛋白與所述宿主細胞分離。

11.如權利要求10所述的方法，其中，步驟d)中，通過離心或膜過濾，去除經步驟c)照射后的所述片段混合物中包含所述功能片段的部分，獲得純化的所述目的肽。

12.如權利要求1所述的方法，其中，所述方法包含如下步驟：

a)在宿主細胞中表達融合蛋白，所述融合蛋白包含目的肽、用于純化的功能片段以及連接所述目的肽和所述功能片段的光切割基序；

b)利用勻漿裝置破碎宿主細胞，離心去除所述宿主細胞的勻漿液的可溶部分，獲得包含所述融合蛋白的沉淀部分；

c)利用385nm波長的光對所述融合蛋白照射80-100min，使得所述光切割基序斷裂，得到片段混合物；以及

d)離心或過膜，去除經步驟c)照射后的片段混合物中包含所述功能片段的部分，獲得純化的所述目的肽。

13.如權利要求1所述的方法，其中，步驟b)中，通過將所述宿主細胞裂解或破碎，對所述宿主細胞的裂解液或勻漿液進行親和層析，并在親和層析后對所述融合蛋白進行脫鹽，使得所述融合蛋白與所述宿主細胞分離。

14.如權利要求13所述的方法，其中，步驟d)中，利用所述用于純化的功能片段對包含經步驟c)照射后的片段混合物進行親和層析，并在親和層析后對所述目的肽進行脫鹽，獲得純化的所述目的肽。