[發明專利]膠質瘤預后標志物circ 7:73686636|73687095及應用

有效

• 申請號: 201711453840.3
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107937535B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 付海娟;武明花;劉洋;李沛瑤;趙春花;陳瓊;余志斌
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明屬于生物技術領域，公開了一種膠質瘤預后標志物circ 7:73686636|73687095及應用。即檢測膠質瘤組織中circRNA circ 7:73686636|73687095表達量的試劑用于制備膠質瘤患者的預后制劑。通過研究證實膠質瘤中circRNA circ 7:73686636|73687095表達量較低的患者，擁有更高的術后生存率。通過檢測膠質瘤患者膠質瘤組織中circRNA circ 7:73686636|73687095的表達水平，從而對膠質瘤患者做出預后判斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤預后的circRNA標志物、以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤預后制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

膠質瘤是顱內最常見的發病率和惡性程度較高的顱內腫瘤，目前對膠質瘤的治療主要是手術切除為主，再輔以放化療。但是，即便如此患者的復發率依然很高，2年存活率僅為5％，惡性膠質母細胞瘤平均生存期僅為14個月左右。導致膠質瘤難以治愈的主要因素之一是膠質瘤本身呈現侵襲性生長，腫瘤細胞與正常腦組織的界限十分模糊而難以做到手術完全切除；此外，由于膠質瘤細胞的快速增殖導致了局部腫瘤缺氧微環境的形成,在缺氧微環境下存活下來的腫瘤細胞具有更強的腫瘤惡性表型，是膠質瘤復發和術后放化療抵抗的重要因素。因此，尋找膠質瘤預后標志物對患者進行預后分析，以提高膠質瘤患者的術后生活質量，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是神經科學領域亟待解決研究任務。

circRNA是一類廣泛且多樣地存在于哺乳動物細胞中、具有調控基因表達作用的內源性非編碼RNA分子，具有共價閉合的環形結構，廣泛存在于各種細胞中，也是繼microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究熱點。近年來，隨著深度測序技術的廣泛應用和生物物理和信息學技術的快速發展，人們發現人類許多外顯子的轉錄本可被非線性地反向剪接或通過基因重排而形成circRNA，且它們在所有剪接轉錄本中占了相當大的比例。近年來逐漸發現外泌體中也含有大量的CircRNA，可能發揮重要作用。目前，由于CircRNA具有豐富性、穩定性、高保守性和時空特異性等特點，在腫瘤診斷標志物方面正發揮越來越大的作用。

發明內容

本發明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤患者預后的膠質瘤組織來源的circRNA標志物circ 7:73686636|73687095，其序列如SEQ NO:1所示。

本發明的第二個目的是，提供檢測所述的circRNA標志物在膠質瘤組織中表達量的試劑在制備膠質瘤預后制劑中的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種膠質瘤預后試劑盒，能夠測定膠質瘤組織中的circ 7:73686636|73687095的含量。

所述的膠質瘤預后試劑盒，含有檢測circ 7:73686636|73687095含量的PCR引物。優選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤預后試劑盒，除circ 7:73686636|73687095的引物外，還含有從膠質瘤組織中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。包括：

(1)從膠質瘤組織中抽提總RNA所用試劑，包括RNA穩定溶液、Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、無酶水；

(2)以總RNA為模板將circ 7:73686636|73687095逆轉錄為cDNA所用試劑，包括逆轉錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉錄酶以及circ 7:73686636|73687095所用隨機引物；

(3)將cDNA實時定量PCR所用試劑，包括circRNA circ 7:73686636|73687095實時熒光定量PCR特異性引物、GAPDH內參特異性PCR引物、實時熒光定量SYBR染料、無酶水。