[發明專利]膠質瘤診斷標志物hsa_circ_0135404及應用

有效

• 申請號: 201711453680.2
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107937529B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 李沛瑤;武明花;劉濤;孫英男;佘曉玲;王維;蔣健暉
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明屬于生物技術領域，公開了一種膠質瘤診斷標志物hsa_circ_0135404及應用。本發明通過提取膠質瘤患者血清外泌體，并對其中hsa_circ_0135404的含量進行實時熒光定量PCR分析，發現膠質瘤患者血清外泌體中hsa_circ_0135404表達水平明顯上升(p＝0.0033)，該發現對臨床用于膠質瘤的早期診斷具有很高價值，AUC＝0.879，p0.0001，其敏感度和特異度分別為89.7％和75％。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物、以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤診斷制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

膠質瘤是顱內發病率最高的惡性腫瘤，占顱內腫瘤的40.49％，雖然臨床上采用手術、化療結合的方法進行治療，但由于其浸潤性，對化療藥物低敏感性等原因，經常導致患者術后復發，嚴重威脅人類生命健康。而且一旦確診，大部分都為膠質瘤中晚期，術后生存率不高。另外，在WHO3-4級即高級別腦膠質瘤患者中，預后較差，平均生存壽命不超過五年。因此，尋找膠質瘤診斷標志物對患者進行診斷分析，盡早確診病情，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是神經科學領域亟待解決的研究任務。

circRNA是一類廣泛且多樣地存在于哺乳動物細胞中、具有調控基因表達作用的內源性非編碼RNA分子，具有共價閉合的環形結構，廣泛存在于各種細胞中，也是繼microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究熱點。近年來，隨著深度測序技術的廣泛應用和生物物理和信息學技術的快速發展，人們發現人類許多外顯子的轉錄本可被非線性地反向剪接或通過基因重排而形成circRNA，且它們在所有剪接轉錄本中占了相當大的比例。目前，由于其具有豐富性、穩定性、高保守性和時空特異性等特點，在腫瘤診斷標志物方面正發揮越來越大的作用。

發明內容

本發明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物。

主要內容包括：一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物hsa_circ_0135404，其序列如SEQ NO:1所示。

本發明的第二個目的是，提供檢測所述的circRNA標志物在血清外泌體中表達量的試劑在制備膠質瘤診斷制劑中的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種膠質瘤診斷試劑盒，其能夠測定血清外泌體中的hsa_circ_0135404的含量。

所述的膠質瘤診斷試劑盒含有檢測hsa_circ_0135404含量的PCR引物。優選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，除hsa_circ_0135404的引物外，還含有從血清中提取外泌體、由外泌體中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。包括：(1)提取血清外泌體所需試劑：Total Exosome Isolation Reagent(from serum)，可由Invitrogen公司購得，貨號4478360；(2)提取外泌體RNA所需試劑：Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、75％乙醇、無酶水；(3)逆轉錄所需試劑：隨機引物(Random Primer)、無酶水、5×逆轉錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉錄酶；(4)熒光定量PCR所需試劑：hsa_circ_0135404上下游引物、GAPDH內參上下游引物、SYBR染料、無酶水。

本發明的有益效果在于：首次發現hsa_circ_0135404這種血清外泌體中的環狀RNA，并發現其對膠質瘤具有較高的診斷價值；通過血清circRNA標志物和診斷試劑盒的研制和應用，可以使得膠質瘤的診斷更加方便易行，為臨床醫生快速準確掌握患者病情，為提高臨床治療效果奠定基礎，并為發現具有潛在治療價值的新型小分子藥物靶標提供幫助。

附圖說明

圖1為健康組與膠質瘤組血清外泌體中CircRNA表達水平比較。