[發明專利]膠質瘤預后標志物hsa_circ_0125365及應用

有效

• 申請號: 201711453665.8
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107937528B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 武明花;馮紫陽;李沛瑤;劉長紅;劉濤;佘曉玲;孫英男
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明屬于生物技術領域，公開了一種膠質瘤預后標志物hsa_circ_0125365及應用。即檢測膠質瘤組織來源的circRNA hsa_circ_0125365表達量的試劑用于制備膠質瘤患者的預后制劑。通過研究證實膠質瘤中circRNA hsa_circ_0125365表達量較高的患者，擁有更高的術后生存率。通過檢測膠質瘤患者膠質瘤組織中circRNA hsa_circ_0125365的表達水平，從而對膠質瘤患者做出預后判斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤預后的circRNA標志物、以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤預后制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

腦膠質瘤是成年人最為頻發的腦腫瘤疾病，占顱內腫瘤的40.49％。從確診開始，腦膠質瘤患者平均生存壽命不超過五年。為了診治膠質瘤這種與遺傳物質相關性極高的惡性疾病，必須在分子生物學水平，從遺傳信息表達的方面來探索其發病機理。目前而言膠質瘤的診斷和治療方法雖處于不斷改進階段，但是膠質瘤患者生存率并沒有明顯提高。膠質瘤診斷仍然處于以臨床、病理學和影像學信息為基礎的經驗性階段，而且一經診斷，絕大多數均為中晚期，手術后的生存率不容樂觀。因此，尋找膠質瘤預后標志物對患者進行預后分析，以及提高膠質瘤患者的術后生活質量，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是神經科學領域亟待解決的研究任務。

circRNA是一類廣泛且多樣地存在于哺乳動物細胞中、具有調控基因表達作用的內源性非編碼RNA分子，具有共價閉合的環形結構，廣泛存在于各種細胞中，也是繼microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究熱點。近年來，隨著深度測序技術的廣泛應用和生物物理和信息學技術的快速發展，人們發現人類許多外顯子的轉錄本可被非線性地反向剪接或通過基因重排而形成circRNA，且它們在所有剪接轉錄本中占了相當大的比例，并具有豐富性、穩定性、高保守性和時空特異性等特征，有作為諸多疾病分子標志物的潛力。

發明內容

本發明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤患者預后的膠質瘤組織來源的circRNA標志物hsa_circ_0125365，其序列如SEQ NO:1所示。

本發明的第二個目的是，提供檢測所述的circRNA標志物在膠質瘤組織中表達量的試劑在制備膠質瘤預后制劑中的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種膠質瘤預后試劑盒，能夠測定膠質瘤組織中的hsa_circ_0125365的含量。

所述的膠質瘤預后試劑盒，含有檢測hsa_circ_0125365含量的PCR引物。優選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤預后試劑盒，除hsa_circ_0125365的引物外，還含有從膠質瘤組織中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。包括：

(1)從膠質瘤組織中抽提總RNA所用試劑，包括RNA穩定溶液、Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、無酶水；

(2)以總RNA為模板將hsa_circ_0125365逆轉錄為cDNA所用試劑，包括逆轉錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉錄酶以及hsa_circ_0125365所用隨機引物；

(3)將cDNA實時定量PCR所用試劑，包括circRNA hsa_circ_0125365實時熒光定量PCR特異性引物、GAPDH內參特異性PCR引物、實時熒光定量SYBR染料、無酶水。

本發明研究證實膠質瘤組織來源的circRNA hsa_circ_0125365可用于膠質瘤患者預后分析，膠質瘤組織來源的circRNA hsa_circ_0125365表達量與患者術后生存率具有相關性。因此，可用于膠質瘤患者的預后分析。