[發(fā)明專利]膠質瘤診斷標志物circ1:43920404|43920928及應用

有效

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• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107937527B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設計）人: 李沛瑤;武明花;趙春花;王蓉;劉慶;范禮;陳瓊
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發(fā)明屬于生物技術領域，公開了一種膠質瘤診斷標志物circ1:43920404|43920928及應用。通過熒光定量PCR技術對膠質瘤患者血清外泌體中circ1:43920404|43920928的含量進行分析，發(fā)現(xiàn)膠質瘤患者血清外泌體中circ1:43920404|43920928表達水平相比于正常對照組明顯降低(p0.0001)，ROC曲線分析則顯示其對膠質瘤具有較高診斷價值，AUC＝0.877，p＝0.003，敏感度和特異度分別為85.7％和100％。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物、以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤診斷制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

膠質瘤是顱內發(fā)病率最高的惡性腫瘤，占顱內腫瘤的40.49％，雖然臨床上采用手術、化療結合的方法進行治療，但由于其浸潤性，對化療藥物低敏感性等原因，經(jīng)常導致患者術后復發(fā)，嚴重威脅人類生命健康。而且一旦確診，大部分都為膠質瘤中晚期，術后生存率不高。另外，在WHO3-4級即高級別腦膠質瘤患者中，預后較差，平均生存壽命不超過五年。因此，尋找膠質瘤診斷標志物對患者進行診斷分析，盡早確診病情，并相應地選擇合理的后續(xù)治療方案，提高生存率，是神經(jīng)科學領域亟待解決的研究任務。

circRNA是一類廣泛且多樣地存在于哺乳動物細胞中、具有調控基因表達作用的內源性非編碼RNA分子，具有共價閉合的環(huán)形結構，廣泛存在于各種細胞中，也是繼microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究熱點。近年來，隨著深度測序技術的廣泛應用和生物物理和信息學技術的快速發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)人類許多外顯子的轉錄本可被非線性地反向剪接或通過基因重排而形成circRNA，且它們在所有剪接轉錄本中占了相當大的比例。近年來逐漸發(fā)現(xiàn)外泌體中也含有大量的circRNA，可能發(fā)揮重要作用。目前，由于circRNA具有豐富性、穩(wěn)定性、高保守性和時空特異性等特點，在腫瘤診斷標志物方面正發(fā)揮越來越大的作用。

發(fā)明內容

本發(fā)明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物。

主要內容包括：一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物circ1:43920404|43920928，其序列如SEQ NO:1所示。

本發(fā)明的第二個目的是，提供檢測所述的circRNA標志物在血清外泌體中表達量的試劑在制備膠質瘤診斷制劑中的應用。

本發(fā)明的第三個目的是，提供一種膠質瘤診斷試劑盒，其能夠測定血清外泌體中的circ1:43920404|43920928的含量。

所述的膠質瘤診斷試劑盒含有檢測circ1:43920404|43920928含量的PCR引物。優(yōu)選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，除circ1:43920404|43920928的引物外，還含有從血清中提取外泌體、由外泌體中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。包括：(1)提取血清外泌體所需試劑：Total Exosome Isolation Reagent(from serum)，可由Invitrogen公司購得，貨號4478360；(2)提取外泌體RNA所需試劑：Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、75％乙醇、無酶水；(3)逆轉錄所需試劑：隨機引物(Random Primer)、無酶水、5×逆轉錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉錄酶；(4)熒光定量PCR所需試劑：circ1:43920404|43920928上下游引物、GAPDH內參上下游引物、SYBR染料、無酶水。