[發明專利]長效重組人促紅素的生產方法

在審

• 申請號: 201711452469.9
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN107937425A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 程度勝;桑建彬;薛霞;韓明娣;龍應國
• 申請（專利權）人: 北京四環生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C07K1/22;C07K1/16
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙)11357
• 代理人: 孫艷敏

1.一種長效重組人促紅素的生產方法，包括如下步驟；

(1)將人IgG2的Fc片段基因連接到人促紅素基因的3′端，利用脂質體將含有hEPO-Fc重組基因的質粒轉染CHO細胞；CHO細胞用無血清基質經擴增培養，在培養液中分泌表達rhEPO-Fc融合蛋白；

(2)培養液經過離心，取上清液，調pH值至3.5-4.0，上清液變濁，離心或過濾除去沉淀物；

(3)除去沉淀物后的含目的蛋白溶液上rProtein A Beads層析柱進行層析分離，得粗rhEPO-Fc融合蛋白；

(4)粗rhEPO-Fc融合蛋白用分子篩Superdex 200 prep grade進行純化，得精rhEPO-Fc融合蛋白。

2.如權利要求1所述的長效重組人促紅素的生產方法，其特征在于：步驟(2)中調節pH采用鹽酸溶液。

3.如權利要求1所述的長效重組人促紅素的生產方法，其特征在于：所述步驟(3)為：

將步驟(2)除去沉淀物后的溶液，用NaOH調節pH值到中性，上rProtein A Beads層析柱，柱規格5cm*8cm，然后用5倍柱體積的pH7.0的緩沖液進行洗雜，所用緩沖液為0.15MNaCl-20mMNa₂HPO₄，然后用10倍柱體積pH3.0的0.1M甘氨酸洗脫液進行洗脫，收集洗脫液，用NaOH調節pH值到中性。

4.如權利要求1所述的長效重組人促紅素的生產方法，其特征在于：所述步驟(4)上分子篩純化過程為：分子篩Superdex 200 prep grade層析柱先用pH7.0的150mMNaCl緩沖液平衡，再將樣品上柱純化。