[發明專利]一種基于超高效液相色譜串聯四級桿飛行時間質譜鑒定五常大米真偽的方法

有效

• 申請號: 201711451100.6
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108362782B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 王卉;韓平;王紀華;羅娜
• 申請（專利權）人: 北京農業質量標準與檢測技術研究中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;郭奧博

1.一種基于超高效液相色譜串聯四級桿飛行時間質譜鑒定五常大米真偽的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）樣品預處理：取五常大米樣品，磨成粉后過篩，先采用體積比98~100:1的水/甲酸溶液進行振蕩提取，離心取上清液后再加入體積比95~100：2~5：1的乙醇/水/甲酸溶液進行振蕩提取，離心后取上清液，得樣品溶液；

（2）用超高效液相色譜串聯四級桿飛行時間質譜對所述樣品溶液進行檢測，獲得五常大米的代謝指紋圖譜數據；其中：

超高效液相色譜的色譜柱為ACQUITY UPLCHSS T3 其規格為：1.7 μm，100 mm×2.1 mm，Waters，流動相以含有0.05~0.15%甲酸的水溶液為水相、乙腈為有機相進行線性梯度洗脫；

洗脫過程具體為：0~0.25min水相的體積百分比為98%，0.25~12.25min水相的體積百分比為98%至1%，12.25~13.0min水相的體積百分比為1%；13.01~17.0 min：水相的體積百分比為98%，余量為有機相；

四級桿飛行時間質譜在ESI⁺模式下采集m/z 50~1200的信號，并同時收集化合物的母離子和碎片離子的信息，作為代謝指紋圖譜數據；

（3）取非五常大米樣品，按照與步驟（1）、（2）相同的方法進行預處理和檢測，獲得非五常大米的代謝指紋圖譜數據；

（4）對步驟（2）獲得的五常大米代謝指紋圖譜數據以及步驟（3）獲得的非五常大米代謝指紋圖譜數據進行分析，確定五常大米中含有而非五常大米中不含有的化合物，作為標志性化合物；

（5）取待測樣品，按照與步驟（1）、（2）相同的方法進行預處理和檢測，獲得待測樣品的代謝指紋圖譜數據；

如待測樣品的代謝指紋圖譜數據中包括全部所述標志性化合物的數據，且這些化合物在待測樣品代謝指紋圖譜中的響應值與五常大米代謝指紋圖譜中相應化合物的響應值相比無顯著性差異，則判斷所述待測樣品為五常大米；

如待測樣品的代謝指紋圖譜數據中未包括全部標志性化合物的數據，或包含的標志性化合物在待測樣品代謝指紋圖譜中的響應值與五常大米代謝指紋圖譜中相應化合物的響應值相比存在顯著性差異，則判斷所述待測樣品不是五常大米；

所述標志性化合物為：

。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述非五常大米樣品的種類大于20種。

3.根據權利要求2所述的方法，所述非五常大米包括：塞外香富硒香米、太糧靚蝦王香軟米、方家鋪子響水大米、袁隆平珍貢米、太糧馬壩龍油粘米、南北通道農家鄉米、金龍魚蘇北米、華潤五豐盤錦大米、陜西安康富硒糙米、香滿園優選珍珠香米、華潤五豐蘇北大米、御道府生態大米、東北石板大米、七河源長粒粳米、七河源原香米、福臨門秋田小町、七河源小町米、十月稻田小町米、江西上饒萬年貢米、天地糧人有機大米、親情沂蒙人有機大米。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品預處理步驟中：每0.1g樣品加入2~3 mL水/甲酸溶液振蕩提取2次，收集上清液；再加入乙醇/水/甲酸溶液2~3 mL振蕩提取2次，收集上清液。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述樣品預處理具體包括：磨成粉后過50目篩，每0.1 g樣品加入2~3 mL體積比99:1的水/甲酸溶液振蕩提取2次，每次振蕩提取10~20 min，以轉速10000 rpm離心5~15 min后收集上清液；再加入體積比98:2:1的乙醇/水/甲酸溶液2~3 mL振蕩提取2次，每次振蕩提取10~20min，以轉速10000 rpm離心5~15 min后收集上清液，過0.2 μm濾膜，得樣品溶液。

6.根據權利要求1~5任意一項所述的方法，其特征在于，所述線性梯度洗脫時流動相的流速為0.45~0.6 mL·min^-1。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜的條件包括：柱溫38~40℃，進樣體積為1.5~3.5 μL。