[發明專利]Glypican-3特異性抗體及其特異性CAR-T細胞

有效

• 申請號: 201711449721.0
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN109970859B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發明（設計）人: 曹衛
• 申請（專利權）人: 亙喜生物科技（上海）有限公司;亙利生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/13;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;徐迅

本發明涉及Glypican?3特異性抗體及其特異性CAR?T細胞。具體地，本發明涉及一種抗人GPC?3單克隆抗體，其包含具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的VH的和具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列的VL。本發明還涉及一種嵌合抗原受體融合蛋白和包含該融合蛋白的CAR?T細胞，從N末端至C末端包括：(i)本發明的單鏈抗體(scFv)，(ii)跨膜結構域，(iii)至少一種共刺激結構域，和(iv)激活域。

技術領域

本發明涉及基因治療領域，更具體地涉及一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3，GPC 3)特異性抗體及其特異性CAR-T細胞，其可用于腫瘤的過繼免疫基因治療。

背景技術

免疫治療是一種非常有前途的治療癌癥的方法。T細胞或T淋巴細胞是免疫系統有效的武器，它們能夠持續性地幫我們區分正常細胞和外來抗原或非正常細胞，如癌癥或被感染的細胞?；蛐揎椀那逗峡乖荏wT細胞(CAR-T)是設計腫瘤特異性T細胞的常見方案。將靶向腫瘤相關抗原(TAA)的CAR-T細胞輸入患者(稱為過繼細胞轉移或ACT)，這代表了一種有效的免疫治療方法。與化療或抗體技術相比，CAR-T技術的優點在于重編程的T細胞可以增殖并在患者體內持續存在(“活的藥物”)。

CAR(嵌合抗原受體)通常是由一個單克隆抗體衍生的單鏈抗體(scFv)通過鉸鏈和跨膜結構域連接到可變數目的胞內信號結構域：單個細胞活化的CD3-ζ結構域；以及和CD3-ζ結構域相連的CD28，CD137(4-1BB)或其他共刺激域(也可用CD27信號結構域代替CD28或CD137結構域)(圖1)。CAR的發展從第一代(沒有共刺激域)到第二代(具有一個共刺激域)到第三代CAR(具有多個共刺激域)。生成的具有多個共刺激域的CAR(即所謂的第三代CAR)會產生增加的細胞溶解活性，并顯著改善CAR-T細胞的持續性，表現出增強的抗腫瘤活性。

然而，目前嵌合抗原受體的研究還有很多不足，還存在復發率高、安全性低等問題。因此，本領域迫切需要開發特異性好、療效穩定、副作用小的嵌合抗原受體。

發明內容

本發明的目的在于提供Glypican-3特異性抗體及其特異性CAR-T細胞。

在本發明的第一方面，提供了一種抗人GPC-3單克隆抗體，所述抗體具有：

(i)氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的重鏈可變區；和

(ii)氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示的輕鏈可變區。

在另一優選例中，所述抗體與人GPC-3蛋白的N末端的前55-200個氨基酸區域結合。

在另一優選例中，所述的抗體選自：動物源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、或其組合。

在另一優選例中，所述的抗體為雙鏈抗體、或單鏈抗體。

在另一優選例中，所述的抗體為單克隆抗體。

在本發明的第二方面，提供了一種單鏈抗體，所述的單鏈抗體具有：

(i)氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的重鏈可變區；和

(ii)氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示的輕鏈可變區。

在另一優選例中，所述的單鏈抗體還包含VH和VL之間的接頭。

在另一優選例中，所述接頭的氨基酸序列如SEQ ID NO.:7所示。

在另一優選例中，所述接頭的氨基酸序列為3-5個重復的SEQ ID NO.:7所示的序列。

在另一優選例中，所述的單鏈抗體具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。

在另一優選例中，所述的單鏈抗體與人GPC-3蛋白的N末端的前55-200個氨基酸區域結合。